[发明专利]检测基因表达量的引物、探针、试剂盒、检测方法及应用

说明书

本申请公开了一种检测基因表达量的引物、探针、试剂盒、检测方法及应用，所述癌基因包括C‑MYC、C‑FOS、K‑RAS、RB、P21和P53中的至少一种,相应的，还公开了所述引物的序列和所述探针的序列。采用本申请的技术方案能够根据需求设置相应的引物和探针，实现对至少一种癌基因的定量检测，能够解决癌基因的检测只能逐一进行检测的问题，有利于检测效率的提升和检测成本的降低。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种检测C-MYC、C-FOS、K-RAS、RB、P21和P53基因mRNA表达量的引物、探针、试剂盒、检测方法及应用，用于检测这几种基因在细胞内的表达。

背景技术

肿瘤的发生及发展是一个逐级进行的复杂生物学过程，细胞内基因能通过易位插入到强启动子附近、自身在染色体内形成多个拷贝、丢失、碱基改变等方式发生突变。体外培养的干细胞具有分化的潜能，细胞内与细胞周期、分化相关的基因若发生突变，其表达水平会发生显著改变，影响细胞的各种生命活动，甚至发展成癌细胞。检测这些基因的表达水平，能够反映或间接反映突变情况。细胞内原癌基因的激活和抑癌基因的失活是肿瘤发生的本质原因。原癌基因与抑癌基因的表达水平和突变状况对于细胞生理的影响是一个动态的过程。原癌基因中，C-MYC、C-FOS和K-RAS这3种基因相对比较重要；抑癌基因中，RB、P21和P53这3种基因相对比较重要。

现有技术中，癌基因表达的检测往往是这对单一的基因进行的，对不同的癌基因的检测只能逐一进行，不仅检测时间长，检测耗材用量大，对于样本量少的珍贵样本更是难以进行高效的检测。

发明内容

为解决上述技术问题，本申请公开了一种检测C-MYC、C-FOS、K-RAS、RB、P21和P53基因mRNA表达量的引物、探针、试剂盒、检测方法及应用，能够解决现有技术中，癌基因的检测只能逐一进行检测的问题，有利于检测效率的提升和检测成本的降低。

为解决上述技术问题，本申请公开了一种检测6种癌基因表达量的引物和探针，所述癌基因包括C-MYC、C-FOS、K-RAS、RB、P21和P53中的至少一种，其中，所述引物的序列和所述探针的序列包括：

进一步的，本申请还公开了包括上述引物及探针的试剂盒，其中，所述试剂盒包括：

细胞裂解试剂；

cDNA合成试剂；

qPCR定量检测试剂。

其中，所述细胞裂解试剂包括裂解液、RNA酶抑制剂及DNA酶；所述cDNA合成试剂包括2×反转录反应液。

其中，所述qPCR定量检测试剂包括2×Probe qPCR Mix、引物探针混合液1和引物探针混合液2。

其中，所述引物探针混合物1包括：内参基因的引物和探针；检测C-MYC基因的引物和探针；检测C-FOS基因的引物和探针；所述引物探针混合液2包括：检测K-RAS基因的引物和探针；检测RB基因的引物和探针；检测P21基因的引物和探针；检测P53基因的引物和探针。

其中，所述内参基因为ATCB基因，引物序列包括SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20；探针序列包括SEQ ID NO:21。

进一步的，本申请还公开了使用上述的试剂盒进行癌基因表达量的检测方法，其中，所述方法包括：

使用细胞裂解试剂对目标细胞进行裂解，得到RNA；

使用cDNA合成试剂将所述RNA逆转录得到cDNA；

将所述cDNA、2×Probe qPCR Mix和所述引物探针混合物1和/或所述引物探针混合物2混合得到待测样本；