[发明专利]检测基因表达量的引物、探针、试剂盒、检测方法及应用

权利要求书

1.一种检测多种癌基因表达量的引物和探针，所述癌基因包括C-MYC、C-FOS、K-RAS、RB、P21和P53中的至少一种，使用内参为ACTB，其特征在于，所述引物的序列和所述探针的序列包括：

2.包括权利要求1所述引物及探针的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

细胞裂解试剂；

cDNA合成试剂；

qPCR定量检测试剂。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述细胞裂解试剂包括裂解液、RNA酶抑制剂及DNA酶；所述cDNA合成试剂包括2×反转录反应液。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述qPCR定量检测试剂包括2×ProbeqPCR Mix、引物探针混合液1和引物探针混合液2。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述引物探针混合物1包括：内参基因的引物和探针；检测C-MYC基因的引物和探针；检测C-FOS基因的引物和探针；所述引物探针混合液2包括：检测K-RAS基因的引物和探针；检测RB基因的引物和探针；检测P21基因的引物和探针；检测P53基因的引物和探针。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述内参基因为ATCB基因，引物序列包括SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20；探针序列包括SEQ ID NO:21。

7.使用权利要求2～6任一项所述的试剂盒进行癌基因表达量的检测方法，其特征在于，所述方法包括：

使用所述细胞裂解试剂对目标细胞进行裂解，得到RNA；

使用所述cDNA合成试剂将所述RNA逆转录得到cDNA；

将所述cDNA、2×Probe qPCR Mix和所述引物探针混合物1和/或所述引物探针混合物2混合得到待测样本；

将所述待测样本放入定量荧光PCR检测仪中按照预设程序进行检测，并得到各基因的CT值。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法包括：所述定量荧光PCR预设程序包括：95℃ 1min，95℃ 15s×40个循环，45℃ 40s×40个循环。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法包括：所述定量荧光PCR检测仪至少可检测FAM、HEX、ROX和CY54种荧光。

10.权利要求2～6任一项所述试剂盒在检测C-MYC、C-FOS、K-RAS、RB、P21和P53基因表达量中的应用。