[发明专利]一株坎式弧菌噬菌体快速初步分离方法

说明书

本发明属于微生物技术领域，涉及到一种坎式弧菌噬菌体快速初步分离方法，具体包括以下步骤：步骤1：培养基及试剂的准备；步骤2：菌液的培养；步骤3：水样的采集；步骤4：水样的处理；步骤5：裂解实验；步骤6：裂解圈透明度判定；本发明的坎式弧菌噬菌体快速初步分离方法能够快速高效，低成本初步分离坎式弧菌噬菌体，解决了取样少，初步分离噬菌体困难的现象。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，涉及到一种坎式弧菌噬菌体快速初步分离方法。

背景技术

坎氏弧菌(V.campbellii)为弧菌属哈维弧菌群(V.harveyigroup)的重要成员，在海洋环境中分布广泛，可引起多种水生动物疾病，是水产养殖动物的致病菌之一，可引起鱼类、虾类和贝类的大量死亡，对水产养殖业造成了巨大的经济损失，因此人们逐渐重视起来。

噬菌体(bacteriophage,phage)是一类寄生于螺旋体、细菌、放线菌、蓝细菌等宿主中，且对生物有益而无害的病毒，其广泛存在于自然界中。目前噬菌体产品因无污染无残留的性质，已被用于水产养殖中，而其高度的专一性，使得对于致病微生物具有很强的侵蚀裂解能力。有报道称，噬菌体产品对于养殖动物的治疗效果要优于抗生素，尤其是在治疗弧菌病方面，有较好的效果。因此需要一种快速高效，低成本初步分离坎式弧菌噬菌体的方法，解决了取样少，初步分离噬菌体困难的现象。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明主要是为了提供一种快速高效，低成本初步分离坎式弧菌噬菌体的方法，解决了取样少，对于初步分离噬菌体困难的现象，以此作为基础，为以后优化分离噬菌体提供新思路。

本发明的技术方案为：一株坎式弧菌噬菌体快速初步分离方法，具体包括以下步骤：

步骤1：培养基及试剂的准备：LB液体培养基、0.75％LB固体培养基、1.5％LB固体培养基、1％LB固体培养基、0.85％-0.9％生理盐水；

步骤2：菌液的培养：将坎式弧菌以1％的量各接种于500mL的LB液体培养基和100mL的LB液体培养基中，30℃，180r/min的恒温摇床中培养24h；

步骤3：水样的采集：用消毒后的水桶在养殖厂区附近的海边，养殖车间病灶池以及车间集苗池的污水排出口这三组各收集10L水，每组收集的水样又分为3个相同的组，作为平行试验组，减少实验误差或者缺失条件；

步骤4：水样的处理：将培养好的坎式弧菌菌液，分别倒入三组含水样的水桶中，同时倒入与菌液等量的LB液体培养基，于室内曝氧24h，氧气大小以氧气气泡刚刚冒出水面为准即可；培养完成后，在各桶中用10mL注射器收集10mL水样，通过0.22μm微孔滤膜过滤，收集滤液，反复过滤3次，从而能够初步的过滤收集到噬菌体；氧气曝气量的大小标准，一方面为了保证微生物正常的生长代谢所需要的氧气，另一方面防止氧气量过大，水溶液易溅出桶外；

步骤5：裂解实验：将培养好的100mL荧光弧菌培养液取出放置于超净工作台上，从中取出100μL均匀的涂布于1％LB固体培养基上，需涂干，再取10μL滤液滴于LB固体培养基中，开启风机吹干滤液水珠后，放置30℃恒温培养箱中培养16-18h；

步骤6：裂解圈透明度判定：用肉眼观察，出现明显透明圈为++，说明噬菌体有很强的裂解效果；出现较为模糊的透明圈为+，说明噬菌体具有裂解能力；没有透明圈为-，说明噬菌体是极微弱或无裂解能力。

本发明的有益效果为：本发明的坎式弧菌噬菌体快速初步分离方法能够快速高效，低成本初步分离坎式弧菌噬菌体，解决了取样少，初步分离噬菌体困难的现象。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式作进一步说明：

实施例1

一株坎式弧菌噬菌体快速初步分离方法，具体包括以下步骤：