[发明专利]一株坎式弧菌噬菌体快速初步分离方法在审
申请号: | 202110084365.7 | 申请日: | 2021-01-21 |
公开(公告)号: | CN112646786A | 公开(公告)日: | 2021-04-13 |
发明(设计)人: | 陈鑫;曾超海;蔡卓东;陈妃业;黎启明;戴小连 | 申请(专利权)人: | 海南海壹水产种苗有限公司;湛江海壹水产种苗有限公司 |
主分类号: | C12N7/00 | 分类号: | C12N7/00;C12N7/02 |
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地址: | 571328*** | 国省代码: | 海南;46 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一株坎式 弧菌 噬菌体 快速 初步 分离 方法 | ||
1.一株坎式弧菌噬菌体快速初步分离方法,其特征在于:具体包括以下步骤:
步骤1:培养基及试剂的准备:LB液体培养基、0.75%LB固体培养基、1.5%LB固体培养基、1%LB固体培养基、0.85%-0.9%生理盐水;
步骤2:菌液的培养:将坎式弧菌以1%的量各接种于500mL的LB液体培养基和100mL的LB液体培养基中,30℃,180r/min的恒温摇床中培养24h;
步骤3:水样的采集:用消毒后的水桶在养殖厂区附近的海边,养殖车间病灶池以及车间集苗池的污水排出口这三组各收集10L水,每组收集的水样又分为3个相同的组,作为平行试验组;
步骤4:水样的处理:将培养好的坎式弧菌菌液,分别倒入三组含水样的水桶中,同时倒入与菌液等量的LB液体培养基,于室内曝氧24h,氧气大小以氧气气泡刚刚冒出水面为准即可;培养完成后,在各桶中用10mL注射器收集10mL水样,通过0.22μm微孔滤膜过滤,收集滤液,反复过滤3次,从而能够初步的过滤收集到噬菌体;
步骤5:裂解实验:将培养好的100mL荧光弧菌培养液取出放置于超净工作台上,从中取出100μL均匀的涂布于1%LB固体培养基上,需涂干,再取10μL滤液滴于LB固体培养基中,开启风机吹干滤液水珠后,放置30℃恒温培养箱中培养16-18h;
步骤6:裂解圈透明度判定:用肉眼观察,出现明显透明圈为++,说明噬菌体有很强的裂解效果;出现较为模糊的透明圈为+,说明噬菌体具有裂解能力;没有透明圈为-,说明噬菌体是极微弱或无裂解能力。
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