[发明专利]基于宏蛋白质组学技术对浓香大曲进行酶系结构解析的方法

权利要求书

1.基于宏蛋白质组学技术对浓香大曲进行酶系结构解析的方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、提取浓香大曲粗酶液并测定粗酶液中的酶活；具体的提取粗酶液的操作为：将浓香大曲破碎后，用Tris-HCL作为溶剂进行提取，大曲与Tris-HCL溶剂的加入量的液固比为1︰5，提取过程中的pH值为7.0，提取时间为2h；所述的酶包括：α-淀粉酶，蛋白酶，纤维素酶或果胶酶中的至少一种；

b、提取宏蛋白样品并采用宏蛋白质组学技术进行解析；

提取的具体操作步骤为：在大曲样品中加入BPP提取液，震荡、离心后取上清液，加入同体积的Tris-饱和酚溶液，再次震荡离心获得含有蛋白的酚层，再加入相同体积的BPP提取液，震荡离心取上清液，加入等体积的乙酸铵甲醇溶液，-20℃过夜沉淀蛋白，在沉淀中加入丙酮，离心去上清，采用裂解液溶解蛋白，得到待测样品；

提取样品的酶解：将提取的蛋白，加入二硫苏糖醇，37°C 孵育1h；冷却至室温，加入碘乙酰胺，室温放置30min；加入胰酶37°C恒温过夜，加入甲酸终止酶切，收集消化后的馏分，保存在-80℃下进行MS分析；

c、将宏蛋白质组学技术解析结果与酶活测定结果进行对比。

2.根据权利要求1所述的基于宏蛋白质组学技术对浓香大曲进行酶系结构解析的方法，其特征在于：步骤b中加入的大曲样品与BPP提取液的比例为0.4g︰1mL。

3.根据权利要求1所述的基于宏蛋白质组学技术对浓香大曲进行酶系结构解析的方法，其特征在于：步骤b中所述的裂解液为含有8M尿素的裂解液。

4.根据权利要求1所述的基于宏蛋白质组学技术对浓香大曲进行酶系结构解析的方法，其特征在于：步骤b中所述的二硫苏糖醇的终浓度为10mM。

5.根据权利要求1所述的基于宏蛋白质组学技术对浓香大曲进行酶系结构解析的方法，其特征在于：步骤b中所述的碘乙酰胺的终浓度为30mM。

6.根据权利要求1所述的基于宏蛋白质组学技术对浓香大曲进行酶系结构解析的方法，其特征在于：步骤b中所述胰酶的加入量为：胰酶与蛋白的质量比为1︰25。

7.根据权利要求1所述的基于宏蛋白质组学技术对浓香大曲进行酶系结构解析的方法，其特征在于：步骤b中所述的甲酸的浓度为0.1%。