[发明专利]一种利用纸芯片对基因组损伤位点数进行绝对定量的检测方法与应用

权利要求书

1.一种利用纸芯片对基因组损伤位点数进行绝对定量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)通过喷蜡打印机制备纸芯片器件；

(2)将具有3’-OH断裂损伤类型的待检测基因组DNA加入到纸芯片器件的反应区进行孵育干燥；

(3)孵育完成后，向纸芯片器件的反应区加入反应液，孵育一段时间后，加入乙二胺四乙酸终止反应，用PBS洗涤后，拍照检测荧光强度，以实现基因组DNA损伤位点数绝对定量检测；所述反应液为末端脱氧核苷酸转移酶与核酸标记荧光染料FITC-dUTP的混合溶液，其中核酸标记荧光染料FITC-dUTP与末端脱氧核苷酸转移酶物质量的比值大于500。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，待检测基因组DNA为碱基烷基化损伤的基因组DNA时，将碱基烷基化损伤的基因组DNA中加入人类烷基腺嘌呤DNA糖基化酶AAG和人源脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶APE 1后孵育，将碱基烷基化损伤的基因组DNA转化为具有3’-OH断裂损伤类型的基因组DNA；待检测基因组DNA为碱基氧化损伤的基因组DNA时，将碱基氧化损伤的基因组DNA中加入8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶FPG和碱性磷酸酶CIAP后孵育，将碱基氧化损伤的基因组DNA转化为具有3’-OH断裂损伤类型的基因组DNA；待检测基因组DNA为碱基脱氨基产生尿嘧啶损伤的基因组DNA时，将碱基脱氨基损伤的基因组DNA中加入尿嘧啶DNA糖基化酶UDG和人源脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶APE 1后孵育，将碱基氧化损伤的基因组DNA转化为具有3’-OH断裂损伤类型的基因组DNA。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中通过喷蜡打印机制备纸芯片器件的具体步骤为：通过喷蜡打印机在滤纸上打印圆形反应区，120～130℃加热2-3min使蜡融进滤纸中。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述滤纸包括Whatman Grade 1或Whatman Grade 5。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述的孵育的条件为室温孵育5-10min。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述末端脱氧核苷酸转移酶的浓度为35nM，所述核酸标记荧光染料FITC-dUTP的浓度为20μM。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)中孵育的条件为室温孵育5-30min。

8.权利要求1-7中任一项所述的检测方法在定量检测3’-OH断裂损伤类型的基因组DNA或修复的3’-OH断裂损伤类型的基因组DNA中的应用。