[发明专利]神经干细胞分化为少突胶质细胞的方法、培养基及用途

说明书

本发明公开了一种神经干细胞分化为少突胶质细胞的方法、培养基及用途。该方法包括如下步骤：将待分化神经干细胞在第一诱导基中培养，形成少突胶质前体细胞；将少突胶质前体细胞在第二诱导基中培养，形成少突胶质细胞；其中，所述第一诱导基中包含第一混合诱导液、血小板衍生生长因子PDGF‑aa和表皮生长因子EGF，所述第一混合诱导液中含有KnockOut血清替代物；所述第二诱导基中包含第二混合诱导液和音猬因子Shh，所述第二混合诱导液中含有KnockOut血清替代物。该方法以低成本的方式提高了诱导率。本发明还公开了培养基及血清替代物的用途。

技术领域

本发明涉及一种神经干细胞分化为少突胶质细胞的方法，还涉及培养基及血清替代物的用途。

背景技术

少突胶质细胞分布于中枢神经系统中，其主要功能是在中枢神经系统中包绕轴突、形成绝缘的髓鞘结构、协助生物电信号的跳跃式高效传递并维持和保护神经元的正常功能。少突胶质细胞异常不仅会导致中枢神经系统脱髓鞘病变，还会引起神经元损伤或神经类疾病，甚至可以引发脑肿瘤。由此可见，少突胶质细胞在大脑中具有重大影响，是人们迫切需要研究的客体。

CN107810268A公开了一种通过直接重编程由人体细胞诱导少突胶质前体细胞的方法，包括：在含有以下物质的培养基中培养其中引入有编码Oct4蛋白的核酸分子的人体细胞：(i)TGF-βI型受体抑制剂；(ii)Rho相关激酶抑制剂；(iii)组蛋白脱乙酰酶抑制剂；以及(iv)音猬因子激动剂。该专利文献还提供了一种使少突胶质细胞前体细胞分化成少突胶质细胞的方法，其包括：在含有Rho相关激酶抑制剂、钙通道激动剂和白血病抑制因子的培养基中培养得到的少突胶质细胞前体细胞。该方法成本高、需要的细胞因子多，且诱导过程冗长。

CN106170543A公开了一种用于诱导体细胞直接转分化为少突胶质细胞祖细胞的组合物，所述组合物包含至少一种蛋白、编码所述蛋白的核酸分子、或包含所述核酸分子的载体作为活性成分，所述至少一种蛋白选自由以下组成的组：直接转分化因子OCT4、SOX1、SOX2、SOX10、OL1G2、NKX2.2和NKX6.2。该方法成本高、实施较为复杂。

少突胶质细胞可以由神经干细胞分化得到。目前存在一些将神经干细胞诱导为少突胶质细胞的方法，但这些方法存在诱导效率偏低的缺陷，不能达到临床研究的标准，阻碍了人们对少突胶质细胞深层次的研究。

发明内容

有鉴于此，本发明的一个目的在于提供一种神经干细胞分化为少突胶质细胞的方法，该方法以低成本的方式提高了诱导率。本发明的另一个目的在于提供一种诱导神经干细胞分化为少突胶质前体细胞的培养基。本发明的再一个目的在于提供一种诱导少突胶质前体细胞分化为少突胶质细胞的培养基。本发明的又一个目的在于提供一种KnockOut血清替代物在诱导神经干细胞分化为少突胶质前体细胞中的用途。本发明的又一个目的在于提供一种KnockOut血清替代物在诱导少突胶质前体细胞为少突胶质细胞中的用途。

一方面，本发明提供了一种神经干细胞分化为少突胶质细胞的方法，包括如下步骤：

将待分化神经干细胞在第一诱导基中培养，形成少突胶质前体细胞；将少突胶质前体细胞在第二诱导基中培养，形成少突胶质细胞；

其中，所述第一诱导基中包含第一混合诱导液、血小板衍生生长因子PDGF-aa和表皮生长因子EGF，所述第一混合诱导液中含有KnockOut血清替代物；所述第二诱导基中包含第二混合诱导液和音猬因子Shh，所述第二混合诱导液中含有KnockOut血清替代物。

根据本发明的方法，优选地，所述第一混合诱导液中KnockOut血清替代物的浓度为2～25vol％；以第一混合诱导液为基准，血小板衍生生长因子PDGF-aa浓度为2～25ng/mL，表皮生长因子EGF浓度为5～40ng/mL；

所述第二混合诱导液中KnockOut血清替代物的浓度为2～25vol％；以第二混合诱导液为基准，音猬因子Shh浓度为5～40ng/mL。