[发明专利]一种沙门氏菌闭管快速可视化检测试剂盒及其检测方法有效
| 申请号: | 202110078752.X | 申请日: | 2021-01-21 |
| 公开(公告)号: | CN112391486B | 公开(公告)日: | 2021-04-23 |
| 发明(设计)人: | 许文涛;杜再慧;林晟豪;李佳乐 | 申请(专利权)人: | 中国农业大学 |
| 主分类号: | C12Q1/689 | 分类号: | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/42 |
| 代理公司: | 北京领科知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11690 | 代理人: | 张丹 |
| 地址: | 100083 *** | 国省代码: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 沙门氏菌 快速 可视化 检测 试剂盒 及其 方法 | ||
1.一种沙门氏菌闭管快速可视化检测试剂盒用于非疾病诊断目的的沙门氏菌闭管快速可视化检测方法,其特征在于,所述试剂盒包含集成管、纳米金增强的LAMP扩增体系及相关试剂;
所述集成管为自制螺口管,有管身和管盖组成;且管盖内侧包含有风干的负染检测试剂;
所述纳米金增强的LAMP扩增体系包括LAMP扩增引物、dNTPs、甜菜碱、MgSO4、缓冲液、BstDNA聚合酶、纳米金、石蜡油及水;
其中LAMP扩增引物包括:
inv A-F3引物:序列如SEQ ID NO:1;
inv A-B3引物:序列如SEQ ID NO:2;
FIP引物:序列如SEQ ID NO:3;
BIP引物:序列如SEQ ID NO:4;
所述负染检测试剂为0.1 M CuSO4溶液;
所述方法采用前述纳米金增强LAMP扩增体系对沙门氏菌基因组进行扩增,然后直接使用集成管对扩增产物进行检测,所述扩增产物在集成管中上下颠倒几次,将CuSO4与LAMP扩增体系混匀,1min内观察溶液的变化:溶液上部出现环形聚集物,则无沙门氏菌;无环形聚集物,则含有沙门氏菌。
2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述检测方法的反应体系如下:
3.根据权利要求2所述的检测方法,其特征在于,所述检测方法的反应体系如下:
4.根据权利要求1-3任一所述的检测方法,其特征在于,所述扩增的反应程序为60-68℃ 10-50 min,70-90℃ 1-15 min。
5.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于,所述扩增的反应程序为64℃ 30 min,80℃ 5 min。
6.权利要求1-5任一所述的检测方法在食品安全检测中的应用。
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