[发明专利]一种高线性人血清淀粉样蛋白试剂盒、制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种高线性人血清淀粉样蛋白试剂盒，涉及医学生物检测技术领域，包括试剂R1、试剂R2和SAA校准品，其中，试剂R2内包括收敛聚合聚苯乙烯微球；收敛聚合聚苯乙烯微球由聚苯乙烯微球先加入去离子水进行错流过滤，然后加入氯化铯和十二烷基苯磺酸钠并搅拌混匀，通入氩气去除氧气后，加入过硫酸钾，引发微球内部的收敛聚合反应。本发明还提出了一种血清淀粉样蛋白A测定方法的应用，使用高线性人血清淀粉样蛋白试剂盒采用免疫比浊法对血清淀粉样蛋白A测定的应用，本发明在不增加原料成本，适用范围广，有效减少了宽线性高SAA抗原过剩的难度。提高胶乳免疫比浊试剂性能，降低试剂成本。

技术领域

本发明属于医学生物检测技术领域，具体涉及一种高线性人血清淀粉样蛋白试剂盒、制备方法及应用。

背景技术

血清淀粉样蛋白A(serumamyloidA,SAA)是由活化的单核/巨噬细胞释放的细胞因子合成的载脂蛋白家族，为组织淀粉样蛋白A的前体物质，属急性时相反应蛋白。炎症、感染性和非感染性疾病期间，在血液中的浓度能在数小时内急剧升高。尤其是当病毒感染、心血管疾病、移植排斥反应时，SAA的敏感性可高于CRP，对临床诊断有更好的参考价值。

目前市面上SAA的检测方法主要为生化免疫比浊的方法，其优点在于通量大，测试快，精准。然而SAA抗原过剩(安全区)和线性范围是SAA免疫比浊试剂盒最重要的性能指标之一。抗原过剩是免疫比浊试剂实现定量检测的前提和范围，即在抗原过剩范围内才可以定量报告结果，是线性范围的前提。抗原过剩范围是指高因Hook效应，样本测定结果不低于线性范围上限的最高浓度值。重要的炎症标志物血清淀粉样蛋白A，线性范围上限一般要达到320mg/L或是更高，抗原过剩范围不低于1000mg/L。增加抗体使用量在一定范围内可以提高线性和抗原过剩范围，但在其他条件不变情况下，该方案即提高了试剂成本，又只能在较小幅度使用。同时由于增加抗体量带来的微球表面抗体密度提高，会导致试剂灵敏度提升。在检测系统检测范围有限的情况下，灵敏度和线性范围互相制约，当灵敏度高到一定程度后，就算降低增敏剂用量至零，仍然会因为生化仪吸光度检测范围有限，生化仪无法区分高浓度样本的信号差异，限制了线性范围和抗原过剩范围。样本量减少，在仪器技术无重大突破情况下，也是有限度的，而且减少样本量，试剂灵敏度将大幅度降低。本发明的目的是解决上述问题，提供一种高线性人血清淀粉样蛋白试剂盒、制备方法及应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种高线性人血清淀粉样蛋白试剂盒、制备方法及应用，在不增加原料成本，适用范围广，有效减少了宽线性高SAA抗原过剩的难度。提高胶乳免疫比浊试剂性能，降低试剂成本。

本发明提供了如下的技术方案：一种高线性人血清淀粉样蛋白试剂盒，包括试剂R1、试剂R2和SAA校准品，其中，所述试剂R2内包括由收敛聚合的聚苯乙烯胶乳微球构成的收敛聚合聚苯乙烯微球；

所述收敛聚合聚苯乙烯微球的制备方法包括如下步骤：

步骤1、将500ml胶乳溶液中加入去离子水进行错流过滤，再通过50KD截留孔径超滤膜包加入离子水进行错流过滤，完成5～20倍换液，去除残留的苯乙烯以及羧基单体；

步骤2、将置换蒸馏水后的胶乳溶液加入到反应釜中，加入0.5～2.3g氯化铯和0.1～1.6g十二烷基苯磺酸钠并搅拌混匀，反应釜放在恒温水浴锅中，保持50℃的恒温，300rpm机械搅拌20min；

步骤3、然后通入氩气去除氧气10min，加入0.1～0.5g过硫酸钾，二次引发微球内部的收敛聚合反应。

进一步的，所述试剂R1包括如下组分：磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、PEG6000、吐温～20和曲拉通101；可选地，试剂R1包括下述浓度的组分：1.01～6.44g/L的磷酸氢二钠、0.24～5.24g/L的磷酸二氢钾、1.0～30.0g/L的氯化钠、0.2～5.5g/L的氯化钾、3～25g/L的PEG600、0.5～4.0g/L的吐温～20和0～4.0g/L曲拉通101；