[发明专利]一种高线性人血清淀粉样蛋白试剂盒、制备方法及应用

权利要求书

1.一种高线性人血清淀粉样蛋白试剂盒，其特征在在于，包括试剂R1、试剂R2和SAA校准品，其中，所述试剂R2内包括由收敛聚合的聚苯乙烯胶乳微球构成的收敛聚合聚苯乙烯微球；

所述收敛聚合聚苯乙烯微球的制备方法包括如下步骤：

步骤1、将500ml胶乳溶液中加入去离子水进行错流过滤，再通过50KD截留孔径超滤膜包加入离子水进行错流过滤，完成5～20倍换液，去除残留的苯乙烯以及羧基单体；

步骤2、将置换蒸馏水后的胶乳溶液加入到反应釜中，加入0.5～2.3g氯化铯和0.1～1.6g十二烷基苯磺酸钠并搅拌混匀，反应釜放在恒温水浴锅中，保持50℃的恒温，300rpm机械搅拌20min；

步骤3、然后通入氩气去除氧气10min，加入0.1～0.5g过硫酸钾，二次引发微球内部的收敛聚合反应。

2.根据权利要求1所述的一种高线性人血清淀粉样蛋白试剂盒，其特征在于，所述试剂R1包括如下组分：磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、PEG6000、吐温～20和曲拉通101；可选地，试剂R1包括下述浓度的组分：1.01～6.44g/L的磷酸氢二钠、0.24～5.24g/L的磷酸二氢钾、1.0～30.0g/L的氯化钠、0.2～5.5g/L的氯化钾、3～25g/L的PEG600、0.5～4.0g/L的吐温～20和0～4.0g/L曲拉通101；

和/或，所述试剂R2包括如下组分：收敛聚合聚苯乙烯微球、SAA单克隆抗体081和SAA单克隆抗体082、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾和BSA，可选地，所述试剂R2包括下述浓度的组分：0.15％～0.35％的收敛聚合聚苯乙烯微球、40～80mg/LSAA单克隆抗体081、40～80mg/LSAA单克隆抗体082、1.01～6.44g/L的磷酸氢二钠、0.24～5.24g/L的磷酸二氢钾、1.0～20.0g/L的氯化钠、0.2～5.5g/L的氯化钾和5～30g/L的BSA；

和/或，所述校准品包括如下组分：血清淀粉样蛋白A抗原。

3.根据权利要求2所述的一种高线性人血清淀粉样蛋白试剂盒，其特征在于，所述试剂R1包括下述浓度的组分：1.24～6.44g/L的磷酸氢二钠、0.24～3.9g/L的磷酸二氢钾、1.0～30.0g/L的氯化钠、1.01～2.8g/L的氯化钾、3～15g/L的PEG6000、0.5～4.0g/L的吐温～20和0.5～4.0g/L曲拉通101。

4.根据权利要求2所述的一种高线性人血清淀粉样蛋白试剂盒，其特征在于，所述试剂R2包括下述浓度的组分：0.15％～0.35％的收敛聚合聚苯乙烯微球、40～80mg/L的SAA单克隆抗体081、40～80mg/L的SAA单克隆抗体082、0.06～0.3g/L1.01～6.44g/L的磷酸氢二钠、1.01～5.24g/L的磷酸二氢钾、1.0～20.0g/L的氯化钠、1.21～3.2g/L的氯化钾、和5～30g/L的BSA。

5.一种血清淀粉样蛋白A测定方法的应用，其特征在于，使用权利要求1～4任一项所述的高线性人血清淀粉样蛋白试剂盒采用免疫比浊法对血清淀粉样蛋白A测定的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，应用免疫比浊法的血清淀粉样蛋白A的测定方法，具体包括如下：

(1)、设置生化分析仪的参数，并加入样本S和试剂R1，然后混匀，置37℃孵育300秒，之后加入试剂R2并混匀，置37℃孵育15～35秒，测定波长下的吸光度值A1，反应255～305秒，测定波长下的吸光度值A2；

(2)、分别计算校准品的吸光度变化值ΔA，并绘制校准曲线，校准曲线使用多点非线性spline拟合；

(3)、将样本测定的吸光度变化值按拟合的公式进行计算，即可得出样本中血清淀粉样蛋白A的浓度ΔA，

ΔA＝A2-A1，

其中，A1和A2分别为加入试剂R1与样品的吸光度A1和当加入R2后的吸光度值A2。