[发明专利]一种芽孢杆菌的PCR模板及其制备方法和应用有效
申请号: | 202110074773.4 | 申请日: | 2021-01-20 |
公开(公告)号: | CN112646861B | 公开(公告)日: | 2023-09-22 |
发明(设计)人: | 曹树威;廖玉英;邱磊;王自豪;卢慧林;甘露;陈政瑜;刘克俊;黄焕昌;卢文宜;向雷 | 申请(专利权)人: | 广西壮族自治区畜牧研究所 |
主分类号: | C12Q1/6806 | 分类号: | C12Q1/6806;C12Q1/689;C12Q1/04;C12R1/125;C12R1/10;C12R1/07;C12R1/11;C12R1/085 |
代理公司: | 北京汇捷知识产权代理事务所(普通合伙) 11531 | 代理人: | 邢文月 |
地址: | 530001 广西壮族自*** | 国省代码: | 广西;45 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 芽孢 杆菌 pcr 模板 及其 制备 方法 应用 | ||
本发明适用于生物技术领域,提供了一种芽孢杆菌的PCR模板及其制备方法和应用,该PCR模板的制备方法包括以下步骤:将芽孢杆菌菌体与DNA提取液进行混合后,再加入石英砂进行混合,同时进行沸水浴处理,得到混合液;将混合液进行离心处理,取上清液,得到所述PCR模板;其中,DNA提取液包括三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、乙二胺四乙酸、聚乙烯吡咯烷酮、蛋白酶K和溶菌酶。本发明实施例提供的制备方法,结合物理和生物等方法,利用石英砂、溶菌酶、蛋白酶K等物质,充分裂解菌体,可在短时间内制备出满足PCR需求的DNA模板,其具有安全、高效、环保等特点。
技术领域
本发明属于生物技术领域,尤其涉及一种芽孢杆菌的PCR模板及其制备方法和应用。
背景技术
芽孢杆菌近年在生态养殖领域应用广泛,种类繁多,功能各异,结合PCR方法对其进行分子鉴定是实现菌株快速分类的重要方法。在制备PCR反应菌株基因组模板时,传统的基因组提取方法耗时耗力,不能满足轻量化、少量化的需求,且需要接触苯酚、氯仿等剧毒的化学物质。
另外,现有的试剂盒虽能在低毒条件下,提高基因组DNA的提取效率,但成本较高,在实验经费预算有限的情况下,难以满足大批量菌株鉴定的需求。
发明内容
本发明实施例的目的在于提供一种芽孢杆菌的PCR模板的制备方法,旨在解决背景技术中提出的问题。
本发明实施例是这样实现的,一种芽孢杆菌的PCR模板的制备方法,其包括以下步骤:
将芽孢杆菌菌体与DNA提取液进行混合后,再加入石英砂进行混合,同时进行沸水浴处理,得到混合液;所述DNA提取液包括三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-Hcl)、乙二胺四乙酸(EDTA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、蛋白酶K和溶菌酶;
将混合液进行离心处理,取上清液,得到所述PCR模板。
作为本发明实施例的另一个优选方案,所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌,地衣芽孢杆菌,解淀粉芽孢杆菌,巨大芽孢杆菌,蜡状芽孢杆菌中的任一种。
作为本发明实施例的另一个优选方案,所述石英砂与DNA提取液的质量体积比以mg/μL计为(0.3~0.7):1
作为本发明实施例的另一个优选方案,所述DNA提取液的pH值为7.5~8.5。
作为本发明实施例的另一个优选方案,所述DNA提取液中,三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的浓度为15~25mmol/L。
作为本发明实施例的另一个优选方案,所述DNA提取液中,乙二胺四乙酸的浓度为1.5~2.5mmol/L。
作为本发明实施例的另一个优选方案,所述DNA提取液中,聚乙烯吡咯烷酮的浓度为8~12g/L。
作为本发明实施例的另一个优选方案,所述DNA提取液中,蛋白酶K的浓度为80~120μg/L。
作为本发明实施例的另一个优选方案,所述DNA提取液中,溶菌酶的浓度为0.8~1.2mg/mL。
本发明实施例的另一目的在于提供一种上述制备方法制得的PCR模板。
本发明实施例的另一目的在于提供一种上述的PCR模板在芽孢杆菌鉴定和/或分类中的应用。
本发明实施例提供的一种芽孢杆菌的PCR模板的制备方法,结合物理和生物等方法,利用石英砂、溶菌酶、蛋白酶K等物质,充分裂解菌体,可在短时间内制备出满足PCR需求的DNA模板,其具有安全、高效、环保等特点。具体的,酶解菌体之前先利用石英砂磨伤菌体,便于酶解更加充分;芽孢杆菌是革兰氏阳性菌,细胞壁的主要成分是肽聚糖,溶菌酶能高效水解肽聚糖,因此,针对芽孢杆菌使用酶解法,大大提高细胞的裂解效率。酶解之后再次用石英砂打磨,从而可以彻底裂解菌体。
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