[发明专利]一种RAP基因检测试剂盒、检测方法和应用及RAP病毒检测试剂盒

权利要求书

1.一种RAP基因检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括外引物对、内引物对、探针和反应液，所述外引物对基于重组酶介导的等温扩增方法设计得到，所述内引物对和探针基于实时荧光定量核酸扩增方法设计得到；

所述反应液包括重组酶介导的等温扩增反应液和实时荧光定量核酸扩增反应液；

所述外引物对中，引物的长度分别为30~35bp；所述内引物对中，引物的长度分别为18~26bp；所述内引物对按照qPCR相应的规则在外引物上截取或者外引物之间设计内引物。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述反应液包括独立包装的镁离子。

3.基于权利要求1或2所述试剂盒的非诊断目的的RAP基因检测方法，包括以下步骤：

利用权利要求1或2所述试剂盒对待测模板进行检测，先进行重组酶介导的等温扩增反应，再进行实时荧光定量核酸扩增反应。

4.根据权利要求3所述的RAP基因检测方法，其特征在于，所述RAP基因检测方法，包括以下步骤：

将外引物对、待测模板、重组酶介导的等温扩增反应液、镁离子和水混合，置于PCR管的管盖上；

将内引物对、探针、实时荧光定量核酸扩增反应液和水混合，置于PCR管的管底；

盖上管盖，采用重组酶介导的等温扩增反应条件进行扩增，离心，采用实时荧光定量核酸扩增反应条件进行扩增。

5.根据权利要求4所述的RAP基因检测方法，其特征在于，所述重组酶介导的等温扩增反应条件包括39℃恒温反应10min。

6.根据权利要求4所述的RAP基因检测方法，其特征在于，所述实时荧光定量核酸扩增反应条件包括：95℃，10min；95℃，15s，60℃，30s，72℃，30s，20个循环。

7.权利要求1或2所述试剂盒或权利要求3~6任一项所述检测方法在检测靶基因中的应用，所述应用是非诊断目的。

8.一种基于权利要求1或2所述试剂盒或权利要求3~6任一项所述检测方法的RAP病毒检测试剂盒，其特征在于，所述病毒包括腺病毒3型、腺病毒7型和呼吸道合胞病毒。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，当所述病毒为腺病毒3时，所述外引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述内引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

当所述病毒为腺病毒7型时，所述外引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.6和SEQ IDNO.7所示，所述内引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；

当所述病毒为呼吸道合胞病毒时，所述外引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示，所述内引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示。