[发明专利]一种脱细胞脐带补片及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种脱细胞脐带补片及其制备方法和应用。本发明的制备方法以人脐带组织制作新型脱细胞细胞外基质补片，对人脐带组织进行脱细胞处理，再经冷冻干燥成型后制备了具有三维多孔海绵样支架的脱细胞脐带补片。本发明的脱细胞脐带补片保留了一定的机械强度和细胞外基质成分，实现完全脱细胞和保留相对完整的胶原纤维结构；脱细胞脐带补片能够避免疾病的传播，同时在脱去细胞后，残留的细胞外基质结构仍富含大量生长因子，能够有效募集周围细胞定植分化。本发明的脱细胞脐带补片呈三维多孔网状结构，孔隙分布较均匀，材料具有一定的机械强度，适合作为促进慢性巨大肩袖损伤修复的新型组织工程材料。

技术领域

本发明涉及组织工程材料领域，尤其涉及种脱细胞脐带补片及其制备方法和应用。

背景技术

肩袖撕裂是最常见的中老年患者肩关节疼痛的最常见病因之一。肩袖撕裂后，一旦没有及时进行手术干预，肩袖的裂口会不断扩大，导致腱-骨交界面被破坏，肌腱组织退变消失和肌肉组织脂肪化。肩袖撕裂的范围超过3cm以上的占所有肩袖损伤的20％及术后再次撕裂病例的80％，称为慢性巨大肩袖损伤。慢性巨大肩袖损伤会导致患者出现严重的肩关节功能障碍，如不能内旋、上抬和后举手臂。而慢性巨大肩袖损伤的手术修复效果差，远期预后结果具有不可预测性，因此利用补片进行损伤部位的修复具有比较可靠的前景。

肩袖补片主要放置于大面积肩袖损伤的部位，起到恢复肩袖的力学传导作用作用。高分子不可降解材料构建的肩袖补片力学性能良好，在初期有着良好的力学性能，但随着时间的延长，不可降解材料会逐渐产生蠕变，导致修复失效。可降解肩袖补片可以在降解的同时发挥募集细胞的作用，促进细胞增殖、组织再生及腱-骨界面修复，从而达到促进损伤肩袖再生的功能。

脐带组织的免疫性低，富含大量的细胞因子，该类补片拥有天然的细胞外基质结构，能为募集的细胞提供合适的生长结构，并诱导细胞定向分化，但其力学性能较差，而且存在着疾病传播的风险。

发明内容

本发明的目的是针对现脐带组织类补片的不足，提供一种脱细胞脐带补片及其制备方法和应用。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

本发明的第一方面是提供一种脱细胞脐带补片的制备方法，包括如下步骤：

步骤一，将经过前处理的脐带片段浸入TBS缓冲液中，置于脱色摇床上室温震荡12-24h；弃去所述TBS缓冲液，然后加入1％Triton X-100高渗溶液，置于脱色摇床上室温震荡12-24h；然后弃去所述高渗溶液，加入含0.03％SDS的TBS缓冲液，置于脱色摇床上室温继续震荡12-24h；

步骤二，弃去所述含0.03％SDS的TBS缓冲液，采用TBS缓冲液冲洗所述脐带片段，室温摇床10-15分钟，重复3-5次，再加入新的TBS缓冲液，置于脱色摇床上室温继续震荡12-24h；弃去所述TBS缓冲液，加入双蒸水冲洗所述脐带片段，室温摇床10-15分钟，重复3-5次，收集清洗过的脐带片段；

步骤三，将清洗过的所述脐带片段置于-20℃低温冰箱保存；采用冷冻干燥机，先预冷30min后，将冻存的所述脐带片段抽真空冻干12-24h；包装密封，即得所述脱细胞脐带补片。

进一步地，所述制备方法还包括质检步骤：

将步骤二得到的所述脐带片段，即脱细胞细胞外基质补片材料进行细胞核的荧光染色，在荧光显微镜下确认是否没有残留的细胞核；

将检测后没有残留细胞核的脱细胞细胞外基质补片材料切成40～50μm的薄片，于所述薄片的表面喷金处理，然后扫描电镜下观察，观察所述薄片的胶原结构是否破坏，若无破坏，则证明成功制备了具有三维多孔海绵样支架的所述脱细胞脐带补片。