[发明专利]一种脱细胞脐带补片及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种脱细胞脐带补片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，将经过前处理的脐带片段浸入TBS缓冲液中，置于脱色摇床上室温震荡12-24h；弃去所述TBS缓冲液，然后加入1％Triton X-100高渗溶液，置于脱色摇床上室温震荡12-24h；然后弃去所述高渗溶液，加入含0.03％SDS的TBS缓冲液，置于脱色摇床上室温继续震荡12-24h；

步骤二，弃去所述含0.03％SDS的TBS缓冲液，采用TBS缓冲液冲洗所述脐带片段，室温摇床10-15分钟，重复3-5次，再加入新的TBS缓冲液，置于脱色摇床上室温继续震荡12-24h；弃去所述TBS缓冲液，加入双蒸水冲洗所述脐带片段，室温摇床10-15分钟，重复3-5次，收集清洗过的脐带片段；

步骤三，将清洗过的所述脐带片段置于-20℃低温冰箱保存；采用冷冻干燥机，先预冷30min后，将冻存的所述脐带片段抽真空冻干12-24h；包装密封，即得所述脱细胞脐带补片。

2.根据权利要求1所述的脱细胞脐带补片的制备方法，其特征在于，还包括质检步骤：

将步骤二得到的所述脐带片段，即脱细胞细胞外基质补片材料进行细胞核的荧光染色，在荧光显微镜下确认是否没有残留的细胞核；

将检测后没有残留细胞核的脱细胞细胞外基质补片材料切成40～50μm的薄片，于所述薄片的表面喷金处理，然后扫描电镜下观察，观察所述薄片的胶原结构是否破坏，若无破坏，则证明成功制备了具有三维多孔海绵样支架的所述脱细胞脐带补片。

3.根据权利要求1所述的脱细胞脐带补片的制备方法，其特征在于，步骤一中，所述前处理具体步骤为：取新鲜脐带迅速置于无菌离心管中并转移到无菌操作台，使用含1％双抗的1xPBS缓冲液清洗至表面无明显血污；使用手术刀将清洗后的脐带切成长度为4-6cm的小段，沿长轴剖开脐带，小心剔除2根脐动脉和1根脐静脉；将小段脐带展开成片状，再用所述1xPBS缓冲液清洗残留血污，得到脐带片段。

4.根据权利要求1所述的脱细胞脐带补片的制备方法，其特征在于，所述TBS缓冲液为0.01mol/LTris-HCl，pH＝8.0缓冲液。

5.根据权利要求1所述的脱细胞脐带补片的制备方法，其特征在于，密封包装的所述脱细胞脐带补片保存于0-4℃的冰箱内，辐照灭菌。

6.根据权利要求5所述的脱细胞脐带补片的制备方法，其特征在于，所述辐照灭菌的辐照条件为25k Gray。

7.一种如权利要求1-6任一项所述制备方法制备的脱细胞脐带补片。

8.根据权利要求7所述的脱细胞脐带补片，其特征在于，使用前需要在所述脱细胞脐带补片的表面均匀地打若干个孔洞。

9.根据权利要求8所述的脱细胞脐带补片，其特征在于，使用前需要在所述脱细胞脐带补片的表面匀地打9个直径为0.5mm的圆形孔洞。

10.如权利要求7-9任一项所述的脱细胞脐带补片在慢性巨大肩袖损伤修复中的应用。