[发明专利]一种用于粪菌移植治疗的粪菌冻干及胶囊制备工艺

权利要求书

1.一种用于粪菌移植治疗的粪菌冻干及胶囊制备工艺，其特征在于，粪菌冻干包括以下步骤：

步骤一：制备粪菌液：将新鲜粪便与温度为2℃～6℃的0.9％无菌生理盐水搅匀稀释，经过多级滤网过滤，取最终滤液，得到全粪菌液，然后将得到的全粪菌液进行多次离心和重悬，离心去上清液，留下沉淀物，沉淀物利用振动器进行摇匀得重悬液，最后将重悬液与甘油混合均匀后放入-70℃～-90℃的冰箱中保存10～15个月；

步骤二：配制冻干保护液：冻干保护液各组分重量含量组成为：10％～20％脱脂奶粉，1％～5％蔗糖，1％～3％明胶，其余为无菌蒸馏水；

步骤三：使用冻干机冻干，冻干过程及冻干参数为：

S1、预冻：温度为-35℃～-45℃，预冻时间150～180min；

S2、抽真空：真空度为0.2，抽真空时间20～30min；

S3、升华：分为9个梯度，每个梯度温度升高5℃，温度从-35℃升温至30℃，每梯度之间升温时间为10min，每个温度节点恒温30-120min；

S4、灭菌：用紫外灯灭菌40～60min。

2.根据权利要求1所述的一种用于粪菌移植治疗的粪菌冻干及胶囊制备工艺，其特征在于，所述蔗糖为纯蔗糖，所述明胶为180冻力的明胶。

3.根据权利要求1所述的一种用于粪菌移植治疗的粪菌冻干及胶囊制备工艺，其特征在于，所述步骤三的冻干过程全程通入高纯氮进行保护。

4.如权利要求1所述一种用于粪菌冻干的冻干保护液的制备方法，其特征在于，冻干保护液制备方法包括以下步骤：

(1)依次将18g脱脂奶粉，1g蔗糖，3g明胶用称量纸称好，倒入锥形瓶，加入60℃蒸馏水边加水边混匀至100ml；

(2)将混匀后的冻干保护液放入高温高压灭菌锅中，121℃灭菌20min。

5.一种用于粪菌移植治疗的粪菌胶囊制备工艺，其特征在于，胶囊制备工艺的过程包括以下步骤：

步骤一：将粪菌液从-80℃冰箱中取出，置于37℃水浴锅中解冻20～30min，取出，放入离心机，5000r，4℃离心5分钟；

步骤二：冻干保护剂配制；

步骤三：培养基配制；

步骤四：取出离心后的菌液，每管加入10ml冻干保护剂，振荡器混匀，用两个冻存管分别留1ml样品，其中一管做冻干前细菌计数实验；

步骤五：留样：取五个冻存管编号1，2，3，4，5，每管加入混匀后的菌液1ml，第一天，一周，一个月，三个月，一年分别做留样细菌计数实验；

步骤六：分装：将每管菌液加入西林瓶中，西林瓶以及留样的五个冻存管同时放入冻干机，设置预冻温度为-45℃，冻干24h，冻干后湿度控制在40以下；

步骤七：灌装：将冻干粉倒入胶囊填充板上，灌装0号胶囊；

将灌装好的胶囊和留样的冻存管置于-20℃冰箱中保存。

6.根据权利要求5所述的一种用于粪菌移植治疗的粪菌胶囊制备工艺，其特征在于，所述培养基的配方成分(g/L)为：蛋白胨10g，牛肉粉5g，酵母粉4g，葡萄糖20g，吐温80 1ml，磷酸氢二钾2g，乙酸钠5g，柠檬酸三铵2g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.05g，琼脂15g。

7.根据权利要求5所述的一种用于粪菌移植治疗的粪菌胶囊制备工艺，其特征在于，所述培养基的制备方法：取12.9gMRS培养基溶于200ml装有蒸馏水的锥形瓶，边搅拌边混匀，调节PH为7.3±0.2，然后使用高压灭菌锅，在121℃高温下灭菌20min。

8.根据权利要求5所述的一种用于粪菌移植治疗的粪菌胶囊制备工艺，其特征在于，粪菌胶囊的选择为肠溶明胶空心胶囊。