[发明专利]一种人内胚层分化培养基以及培养方法

权利要求书

1.一种体外诱导干细胞向肝细胞分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1将内胚层细胞在含有20ng/ml BMP2、30ng/ml FGF4和B27 Supplement的RPMI-1640培养基中培养96h，每天换液；

S2接着在含有20ng/ml HGF、20ng/ml KGF和B27 Supplement的RPMI-1640培养基培养144h，每天换液；

S3继续在含有20ng/ml Oncostatin M的HCM Hepatocyte Culture Medium BulletKit培养液中该培养；每天换液，培养192h，每天换液；得到由干细胞分化的肝细胞；

所述内胚层细胞由体外诱导干细胞分化得到，具体包括以下步骤：

（1）预处理阶段：以Vitronectin作为细胞培养的基质胶，将干细胞在含有Y-27632的E8培养基中培养，待细胞汇合度为80~90%时开始内胚层诱导；

（2）内胚层诱导阶段包括以下步骤：

（a）将步骤（1）得到的干细胞在A培养基中诱导培养24h；

（b）在B培养基中诱导培养48h，每天换液；得到由干细胞分化的内胚层细胞；

所述干细胞为人诱导性多能干细胞；

所述A培养基由以下组分组成：DMEM/F12培养基、维生素C和ChIR99021；B培养基由以下组分组成：DMEM/F12培养基、维生素C和LDN-193189；

所述维生素C的浓度为50~100mg/ml，所述ChIR99021的浓度为1~6μM；所述LDN-193189的浓度为0.05~2μM。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述ChIR99021的浓度为3μM。