[发明专利]一种眼球前房注射MNU诱导动物角膜内皮病变的方法

说明书

本发明公开了一种眼球前房注射MNU诱导动物角膜内皮病变的方法，诱导方法步骤如下：a.在SPF条件下饲养成年新西兰兔；b.待步骤a完成后，将MNU溶解在30％二甲基亚砜(DMSO)和70％磷酸盐缓冲盐水(PBS)的混合液中，接着分别以MNU2.0、2.5、3.0mg/kgBW的剂量进行兔眼前房内注射(n＝8)，然后通过角膜缘将150μlMNU溶液或溶剂(DMSO和PBS混合液)注入前房；c.待步骤b完成后，再对眼压和眼前节进行检查，分别在MNU建模后P1，P3，P7，P14和P28天对兔进行双眼眼压，裂隙灯拍照及眼前节光学相干断层扫描(AS‑OCT)检查。本发明采用MNU诱导角膜内皮失代偿模型，在技术操作上比较简单，避免了一致性及可重复性差等问题，而且不会引起一些不希望出现的并发症。

技术领域

本发明涉及角膜内皮失代偿模型技术领域，具体为一种眼球前房注射MNU诱导动物角膜内皮病变的方法。

背景技术

如今，随着白内障的发病率呈指数级增长，以超声乳化术为主的白内障手术成为角膜内皮失代偿的最常见原因。通常，角膜内皮失代偿作为手术并发症，占白内障手术的1-2％。白内障术后角膜水肿是北美穿透性角膜移植术的排名第一位的主要适应症(28.0％)，在欧洲(20.6％)，澳大利亚(21.1％)，中东(13.6％)，亚洲(15.5％) 以及南美(18.6％)则是排名第二的穿透性角膜移植术适应症。使用 8-OHdG作为氧化应激标记物，证明了超声乳化产生的氧自由基是导致角膜内皮损伤的原因。此外，白内障手术是最常见的导致中毒性眼前节综合征(toxic anterior segment syndrome TASS)发生的手术，引起严重的角膜内皮损伤。与角膜上皮能够自我更新不同，人类角膜内皮细胞(corneal endothelial cellsCECs)不可再生。人CECs 严重损伤会引起角膜内皮失代偿，最终导致患者视物模糊，眼部不适甚至疼痛。

目前已有几种方法可在动物眼中产生角膜内皮失代偿，例如机械性损伤，前房内注射磁性异物或有毒化学物质，角膜冷冻，超声乳化和碱烧伤，尽管已证明这些方法在损伤CECs方面是有效的，但存在技术操作上的困难性，一致性及可重复性差等问题，而且有的可能会引起一些不希望出现的并发症；此外，有些模型不适合模拟主要由超声乳化或TASS引起的角膜内皮失代偿。

发明内容

本发明的目的在于提供一种眼球前房注射MNU诱导动物角膜内皮病变的方法，解决了背景技术中所提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种眼球前房注射 MNU诱导动物角膜内皮病变的方法，诱导方法步骤如下：

a.在SPF条件下饲养成年新西兰兔；

b.待步骤a完成后，将MNU溶解在30％二甲基亚砜(DMSO)和 70％磷酸盐缓冲盐水(PBS)的混合液中，接着分别以MNU2.0、2.5、 3.0mg/kg BW的剂量进行兔眼前房内注射(n＝8)，然后通过角膜缘将 150μl MNU溶液或溶剂(DMSO和PBS混合液)注入前房；

c.待步骤b完成后，再对眼压和眼前节进行检查，分别在MNU建模后P1，P3，P7，P14和P28天对兔进行双眼眼压，裂隙灯拍照及眼前节光学相干断层扫描(AS-OCT)检查，以监测眼压和角膜水肿程度和角膜厚度，接着应用TONO-PEN AVIA压平眼压笔给兔眼进行眼压测量，每眼10次测量在15秒内完成，LCD感应器将自动显示眼压数值及统计可信区间，再用裂隙灯观察MNU诱导角膜内皮失代偿模型的兔角膜水肿及眼前节受累情况，最后用眼前节光学相干断层扫描(AS-OCT) 测量中央角膜厚度(CCT)；

d.待步骤c完成后，再分别在P1，P3，P7，P14，P28进行IVCM 检查，应用“Section”模式逐层扫描角膜全层，观察角膜各层细胞的数量和形态；