[发明专利]一种标准聚苯乙烯绝对计数微球冻干品及其制备方法、应用

说明书

本发明属于细胞检测分析技术领域，具体涉及一种标准聚苯乙烯绝对计数微球冻干品及其制备方法、应用。其中，标准聚苯乙烯绝对计数微球冻干品的制备方法，包括以下步骤：（1）将荧光聚苯乙烯微球分散于冻干保护剂中，得到聚苯乙烯微球混液；（2）取精确定量的聚苯乙烯微球混液置于液氮中，得到球形制剂；（3）将球形制剂置于流式管中，放入冻干机进行冷冻干燥。利用冻干保护剂冻干荧光聚苯乙烯微球，冻干后微球可长期保存，并稳定用于流式淋巴亚群标准绝对计数；经液氮速冻凝结成球形制剂，冻干后球形制剂可便携运输和实验操作；微球冻干效率和回收率高，冻干后微球能够直接用于流式淋巴细胞亚群的绝对计数。

技术领域

本发明属于细胞检测分析技术领域，具体涉及一种标准聚苯乙烯绝对计数微球冻干品及其制备方法、应用。

背景技术

淋巴细胞的水平是机体细胞免疫和体液免疫功能的重要指标。当不同的淋巴细胞亚群的量及功能发生异常改变时，机体就会产生一系列的病理变化及免疫功能失调，因此检测人类淋巴细胞亚群的变化，对一些疾病的早期发现和控制、临床治疗及评估机体免疫状态有着非常重要的意义。

流式细胞术，是临床上检测淋巴亚群的标准，能够同时检测集中淋巴细胞的表面抗原，能够得到亚群细胞的相对比例，通过参照物，可以由相对比例计算出亚群细胞的绝对数量。

目前，亚群细胞的绝对计数比较常用方法是用计数微球。市面上的标准聚苯乙烯绝对计数微球是溶液或粉末，其在实际应用过程中存在以下不足之处：

（1）储存和运输条件苛刻，需要低温（2-8℃）；

（2）储存周期短，保存期限为1年左右；

（3）不能直接用于流式淋巴亚群的绝对计数，需要先验证微球溶液或粉末是否影响抗体试剂反应体系，使用过程繁琐，费时费力，有可能影响抗体试剂的反应体系；

（4）实验操作时有环境污染风险。

因此，本领域亟需提供一种便于实验操作、可便携运输、性能稳定，用于流式淋巴亚群标准绝对计数。

发明内容

基于现有技术中存在的上述不足之处，本发明的目的之一是至少解决现有技术中存在的上述问题之一或多个，换言之，本发明的目的之一是提供满足前述需求之一或多个的一种标准聚苯乙烯绝对计数微球冻干品及其制备方法、应用。

为了达到上述发明目的，本发明采用以下技术方案：

一种标准聚苯乙烯绝对计数微球冻干品的制备方法，包括以下步骤：

（1）将荧光聚苯乙烯微球分散于冻干保护剂中，得到聚苯乙烯微球混液；

（2）取精确定量的聚苯乙烯微球混液置于液氮中，得到球形制剂；

（3）将球形制剂置于流式管中，放入冻干机进行冷冻干燥。

利用冻干保护剂冻干荧光聚苯乙烯微球，冻干后微球可长期保存，并稳定用于流式淋巴亚群标准绝对计数；经液氮速冻凝结成球形制剂，冻干后球形制剂可便携运输和实验操作；微球冻干效率和回收率高，冻干后微球能够直接用于流式淋巴细胞亚群的绝对计数。

作为优选方案，所述冻干保护剂包括磷酸盐缓冲液、海藻糖、甘露醇、牛血清白蛋白和Decon90溶液，冻干保护剂的pH为7.0～7.4。本发明的冻干保护剂的Decon90溶液作为表面活性剂，在冻干微球复溶后，能有效降低复溶悬液表面张力，增强微球亲水性，有助增强微球悬液分散作用。

作为优选方案，所述海藻糖占磷酸盐缓冲液的质量/体积百分比浓度为2～3%。

作为优选方案，所述甘露醇占磷酸盐缓冲液的质量/体积百分比浓度为2～10%。

作为优选方案，所述牛血清白蛋白占磷酸盐缓冲液的质量/体积百分比浓度为1～5%。