[发明专利]维生素冻干粉针剂中N-(4-氨基苯甲酰)-L-谷氨酸的检测方法

说明书

本发明提供一种维生素冻干粉针剂中N‑(4‑氨基苯甲酰)‑L‑谷氨酸的检测方法，包括如下步骤：（1）将N‑(4‑氨基苯甲酰)‑L‑谷氨酸对照品溶于溶剂中，得到N‑(4‑氨基苯甲酰)‑L‑谷氨酸对照品工作溶液，取两份N‑(4‑氨基苯甲酰)‑L‑谷氨酸对照品工作溶液注入液相色谱仪进行检测；（2）将样品溶于溶剂中，得到供试品溶液，将供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，计算供试品溶液中的N‑(4‑氨基苯甲酰)‑L‑谷氨酸含量。本发明突破性的建立了一种在注射用维生素冻干粉针剂中检测维生素B9的杂质N‑对氨基苯甲酰‑L‑谷氨酸的高效液相色谱分析方法，在基质相当复杂维生素冻干粉针剂产品中，实现目标物的无干扰分离，并且同时具有方法简单，分析迅速，结果精确，响应灵敏的特点。

技术领域

本发明涉及注射用维生素冻干粉针剂的维生素B9杂质测定技术领域，尤其涉及一种维生素冻干粉针剂中N-(4-氨基苯甲酰)-L-谷氨酸的检测方法。

背景技术

维生素B9是人体所必需维生素，蛋白质合成及细胞分裂与生长过程中具有重要作用。但同时，维生素B9极其不稳定的性质也广为人知，室温和日光灯都可能使其发生变质产生N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸，精准测定降解产物的含量就显得尤为重要。多种维生素冻干粉针剂拥有着较为复杂的基质，各维生素之间又会存在相互干扰，分析难度较大。

暂未发现注射用维生素冻干粉针剂中对N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸含量进行精密检测方法的相关报道。为了能更客观反映注射用维生素冻干粉针剂中维生素B9的杂质N-(4-氨基苯甲酰)-L-谷氨酸的含量，本发明试图建立一种新的HPLC方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的不足，提供一种维生素冻干粉针剂中N-(4-氨基苯甲酰)-L-谷氨酸的检测方法，建立更加全面、客观、高效的注射用维生素冻干粉针剂中检测维生素B9的杂质N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸检测方法。本发明采用的技术方案是：

一种维生素冻干粉针剂中N-(4-氨基苯甲酰)-L-谷氨酸的检测方法，其中，包括如下步骤：

(1)将N-(4-氨基苯甲酰)-L-谷氨酸对照品溶于溶剂中，得到N-(4-氨基苯甲酰)-L-谷氨酸对照品工作溶液，取两份N-(4-氨基苯甲酰)-L-谷氨酸对照品工作溶液注入液相色谱仪进行检测，第一份进三针，第二份进两针，五针对照品工作溶液中主峰面积/相应对照品称重比值的RSD应不得过2％；

(2)将样品溶于溶剂中，得到供试品溶液，将供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，计算供试品溶液中的N-(4-氨基苯甲酰)-L-谷氨酸含量。

优选的是，所述的维生素冻干粉针剂中N-(4-氨基苯甲酰)-L-谷氨酸的检测方法，其中，所述流动相流速为0.7～0.9ml/min，进样量：2～5μl，柱温：38℃～42℃，采用流动相A和流动相B进行梯度洗脱，采用紫外检测器进行检测，检测波长为273nm。

优选的是，所述的维生素冻干粉针剂中N-(4-氨基苯甲酰)-L-谷氨酸的检测方法，其中，所述流动相A为0.1％甲酸水溶液，所述流动相A的pH 3.8～4.2，流动相B为乙腈。

优选的是，所述的维生素冻干粉针剂中N-(4-氨基苯甲酰)-L-谷氨酸的检测方法，其中，所述乙腈为色谱纯，水为电阻率18.6Ω的超纯水，甲酸为分析纯。

优选的是，所述的维生素冻干粉针剂中N-(4-氨基苯甲酰)-L-谷氨酸的检测方法，其中，所述梯度洗脱过程如下：

优选的是，所述的维生素冻干粉针剂中N-(4-氨基苯甲酰)-L-谷氨酸的检测方法，其中，所述N-(4-氨基苯甲酰)-L-谷氨酸对照品工作溶液的配制过程如下：