[发明专利]一种快速鉴定植物叶绿体完整性的方法

权利要求书

1.一种快速鉴定植物叶绿体完整性的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

1)提取植物细胞中的叶绿体；

2)分离破碎的植物细胞中的叶绿体；

3)将需要鉴定的叶绿体组分转移，离心收集，重悬后得到叶绿体悬液；

4)将荧光染料加入叶绿体悬液中，使叶绿体膜被染色；

5)通过荧光显微镜观察叶绿体膜的完整性区分完整和破损的叶绿体。

2.根据权利要求1所述的一种快速鉴定植物叶绿体完整性的方法，其特征在于，步骤1)中，植物细胞中叶绿体的提取方法为：将待提取叶绿体的植物材料剪碎放入破碎缓冲液GB中，然后进行破碎、过滤和离心收集得到叶绿体。

3.根据权利要求2所述的一种快速鉴定植物叶绿体完整性的方法，其特征在于，所述植物材料为含有叶绿体的植物材料，优选的，所述植物材料选自烟草叶片、菠菜叶片、豌豆叶片、玉米叶片、拟南芥叶片中的一种。

4.根据权利要求2所述的一种快速鉴定植物叶绿体完整性的方法，其特征在于，离心采用离心机进行，所述离心机在使用前，将离心机温度调到4℃进行预冷。

5.根据权利要求1所述的一种快速鉴定植物叶绿体完整性的方法，其特征在于，步骤1)中，每1g植物加入14-20mL的缓冲液GB。

6.根据权利要求1所述的一种快速鉴定植物叶绿体完整性的方法，其特征在于，步骤2)中，采用percoll密度梯度法分离破碎的植物细胞中的总叶绿体。

7.根据权利要求1所述的一种快速鉴定植物叶绿体完整性的方法，其特征在于，步骤3)中，叶绿体悬液为将需要鉴定的叶绿体离心，弃上清，沉淀用缓冲液RB悬浮得到。

8.根据权利要求1所述的一种快速鉴定植物叶绿体完整性的方法，其特征在于，所述步骤4)中，所述荧光染料为罗丹明B或尼罗红。

9.根据权利要求8所述的一种快速鉴定植物叶绿体完整性的方法，其特征在于，所述罗丹明B的使用浓度为0.1mg/L-10mg/L，优选为1mg/L；

所述尼罗红的使用浓度为1mg/L-100mg/L，优选为10mg/L。

10.根据权利要求1所述的一种快速鉴定植物叶绿体完整性的方法，其特征在于，所述步骤4)中，染色时间为2-10分钟。