[发明专利]一种罗汉果甜苷V标准样品的制备方法及应用

说明书

本发明属于分析化学领域，涉及一种罗汉果甜苷V标准样品的制备方法及应用。本发明提供的制备方法包括以下步骤：1)将工业级罗汉果粗提物溶于有机溶剂并用超声帮助溶解，然后用滤膜过滤，得到供试品溶液；2)将步骤1)得到的供试品溶液用高效液相色谱法分离，系统洗脱9～11min后收集馏分；3)将步骤2)收集得到的馏分进行充分的冻干和干燥，得到罗汉果甜苷V标准品。本发明的制备方法经济、快速、有效，能够弥补我国在罗汉果甜苷V标准样品研制方面的技术空白。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种罗汉果甜苷V标准样品的制备方法及应用。

背景技术

罗汉果甜苷V(Mogroside V)是罗汉果甜度的主要来源，具有止咳祛痰、抗癌、抗氧化、调节血糖等药理功效，其在万分之一浓度下的甜度值是5％蔗糖的425倍。因而成为国内外竞相研发的新一代功能性甜味剂，同时还是制药工业的优质辅料。

然而，罗汉果的栽培目前存在许多困难，且罗汉果甜苷V在全果中的含量仅为0.8％-1.3％W/W，但评价罗汉果好坏的其中一个主要指标就是罗汉果甜苷V的含量高。因此为了有效筛选高甜苷V的罗汉果品系，需要对不同品系的罗汉果中的甜苷V含量进行测定。然而目前国内尚未有研究机构能够提供罗汉果甜苷V标准样品及其制备方法，而从国外进口罗汉果甜苷V标准样品存在费用高昂、手续繁琐、到货周期长等问题。另一方面，罗汉果甜苷V类似物复杂且纯化难度高，依赖直接从罗汉果中提取无法实现工业化大规模生产。

申请号为CN201711214793.7的中国发明专利公开了一种制备高纯度罗汉果甜苷V的方法。由该专利方法制备得到的罗汉果甜苷V含量为65％-68％，而在实际检测工作中，标准品的含量或纯度要求一般应大于98％。可见，为满足相关产品的分析检测、质量控制工作的需求，保证检测结果的准确性、可比性和溯源性，急需制备罗汉果甜苷V标准样品。

综上，本发明旨在提供一种罗汉果甜苷V标准品的制备方法及应用，以解决上述问题中的至少一种。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种罗汉果甜苷V标准品的制备方法以及应用。具体技术方案如下。

一种罗汉果甜苷V标准样品的制备方法，包括以下步骤：

1)将工业级罗汉果粗提物溶于有机溶剂并用超声帮助溶解，然后用滤膜过滤，得到供试品溶液；

作为一种优选，在本发明的其中一个实施例中，所述有机溶剂为甲醇。

2)将步骤1)得到的所述供试品溶液用液相色谱法分离，系统洗脱9～11min后收集馏分；本发明中收集9～11min的馏分是通过前期大量探索试验得出；本发明采用的是等度洗脱方式；

3)将步骤2)收集得到的所述馏分进行干燥，然后再将所述馏分冻干20～30h，将冻干后得到的固体研磨成粉末后再次冻干20～30h，得到汉果甜苷V标准品；再次冻干可以进一步降低样品的水分。

进一步，所述滤膜的孔径为0.22μm或0.45μm。

进一步，所述液相色谱法的色谱柱为PREP-ODS(H)·KIT(250mm×20mm，5μm)或WatersXTerraRP18(250mm×20mm，5μm)。

进一步，所述液相色谱法采用的流动相为体积百分比为20～30％的乙腈水溶液，所述流动相的流速为5～15ml/min。

作为一种优选，在本发明的其中一个实施例中，所述乙腈水溶液是23％(v/v)乙腈水溶液；所述流动相的流速为10ml/min。

进一步，所述液相色谱法的柱温为20～30℃，运行时间为10～20min，检测波长约为200～210nm；溶液进样量为0.1～1ml。