[发明专利]一种基于切离酶基因编辑技术的定向修复系统

权利要求书

1.一种基于切离酶基因编辑技术的定向修复系统，其特征在于，包括质粒载体；

所述质粒载体包括：编辑器和指导RNA，所述编辑器与所述指导RNA为非共价结合；

所述编辑器包括用于定向的核酸酶失活的Cas9结构域和XIS切离酶复合体；

所述指导RNA包含编码靶向区域的crRNA和特异性靶向基因；

所述核酸酶失活的Cas9结构域用于与所述指导RNA定向结合定位特异性位点，所述XIS切离酶复合体用于定向切除特异性靶向基因片段。

2.根据权利要求1所述的基于切离酶基因编辑技术的定向修复系统，其特征在于，所述XIS切离酶复合体包括：Mycobacterium phage D29切离酶、Mycobacterium phage L5切离酶、Staphylococcus phage L54a切离酶、Streptomyces ambofaciens切离酶、Bacillussubtilis切离酶、Enterobacteria phage phi80切离酶、Salmonella phage HK620切离酶、Shigella phage Sf6切离酶、Streptococcus pneumoniae切离酶、Streptococcusagalactiae serotype V切离酶、Escherichia phage HK022切离酶、Escherichia phagelambda切离酶、Enterobacteria phage 434切离酶、Enterobacteria phage P21切离酶、Saccharopolyspora erythraea切离酶、Salmonella phage P22切离酶、Acyrthosiphonpisum secondary endosymbiont phage 1切离酶、Shigella phage SfV切离酶和丝状噬菌体切离酶XIS5。

3.根据权利要求1所述的基于切离酶基因编辑技术的定向修复系统，其特征在于，所述核酸酶失活的Cas9结构域包括D10A、D10N、H840A、H840N、H840Y、G1104、L1111、S1136、G1218、N1317、T1337、D1135、S1109、G1104、S1136、R1335、T1337G、1104K、S1109T、L1111、S1136N、G1218R、N1317K、R1335E、T1337R、D1135V、D1135E、R1335Q中的一个或两个以上组合。

4.根据权利要求1所述的基于切离酶基因编辑技术的定向修复系统，其特征在于，所述质粒载体包括：Pllp-OmpA、pllp-STII、pMBP-P、pMBP-C、pET-GST、pET-Trx、pET-His、pET-CKS、pET-DsbA、pTZ19R DNA、pUC57 DNA、PMD18T、PQE30、pUC18、pUC19、pTrcHisA、pTrxFus、pRSET-A和pRSET-B。

5.根据权利要求1或4所述的基于切离酶基因编辑技术的定向修复系统，其特征在于，所述质粒载体还包括：pVAX1、PBR322、pbv220、pBluescript II KS(+)、L4440、pCAMBIA-1301、pMAL-p2X、pGD926、pGEX-2T、pGEX-2TK、pGEX-3X、pGEX-4T-1、pGEX-4T-2、pGEX-4T-3、pGEX-5X-1、pGEX-5X-2、pGEX-5X-3、pGEX-6P-1、pGEX-6P-2、pGEX-6P-3、PTYB1、PTYB2、PTYB11、PTYB12、pCDNA3.1(-)、pCDNA3.1(+)、pPICZ alpha A、pGAPZαA、PYES2.0、pBI121、pEGFP-N1、pEGFP-C1、pPIC9K、pPIC3.5K、PX459、PX458、pAAV、PX462、pUC ori vector、plenti、pFUGW、pAAV、EF1a-lenti、Ai9、pX330-U6-Chimeric_BB-CBh-hSpCas9、pCAGEN、pcDNA3.1和pHKO_23。