[发明专利]ApoE基因缺失斑马鱼的制备在审
| 申请号： | 202110044945.3 | 申请日： | 2021-01-13 |
| 公开（公告）号： | CN112695034A | 公开（公告）日： | 2021-04-23 |
| 发明（设计）人： | 汪利平 | 申请（专利权）人： | 汪利平 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N9/22;C12N15/89;A01K67/027;A01K61/10 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 510000 广东省广州市广州*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | apoe 基因 缺失 斑马 制备 | ||
【权利要求书】：
1.ApoE基因缺失斑马鱼的制备，其特征在于，包括以下步骤：
1)根据ApoE基因序列，确定ApoE靶位点；
2)根据ApoE靶位点，设计Oligo序列；
3)构建gRNA体外转录载体；
4)PCR获得gRNA体外转录模板；
5)对步骤4获得的模板进行体外转录，得到gRNA；
6)制备Cas9 mRNA的体外转录模板；
7)体外转录Cas9 mRNA；
8)添加polyA序列、回收Cas9 mRNA；
9)将Cas9 mRNA和gRNA混合，注射到单细胞期斑马鱼胚胎中；
10)将F0胚胎饲养至性成熟；
11)与野生型成鱼外交，筛选F0；
12)选取可产生有效突变的F0自交，筛选F1；
13)从F1代突变体中挑选相同突变的雌鱼和雄鱼，杂交得到F2代；
14)筛选ApoE基因敲除纯合子即为稳定遗传的ApoE基因缺失斑马鱼。
2.如权利要求1所述的ApoE基因缺失斑马鱼的应用，所述的ApoE基因缺失斑马鱼用于阿尔兹海默症、骨质疏松、冠心病疾病的研究。
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