[发明专利]IL-18基因融合H2Kk基因在制备增强细胞免疫的细胞中的应用、细胞及制备方法

说明书

本发明提供了IL‑18基因融合H2Kk基因在制备增强细胞免疫的细胞中的应用、细胞及制备方法，涉及疫苗制备技术领域。本发明将IL‑18基因融合H2Kk基因后具有增强细胞免疫的作用。

技术领域

本发明涉及疫苗制备技术领域，尤其涉及IL-18基因融合H2Kk基因在制备增强细胞免疫的细胞中的应用、细胞及制备方法。

背景技术

新型冠状病毒(2019-nCoV，SARS-CoV-2)是一种β属的冠状病毒，现有多种疫苗策略可以诱导出针对新型冠状病毒的免疫保护。如通过重组表达的新冠病毒亚单位疫苗、病毒灭活疫苗或者细胞疫苗等。免疫保护主要是通过疫苗诱导出抗体或细胞免疫来清除新冠病原体。在疫苗刺激下，一部分T细胞会分化为具有长期记忆性的记忆T细胞(在小鼠体内，这种细胞高表达CD44分子)。这种记忆T细胞细胞再次遇到抗原之后会产生大量的效应细胞(Effector T)和效应记忆型T细胞(Effective Memory T Cell，Tem)细胞，从而起到长期对新冠病毒的免疫保护作用。但是现有技术中还未有关于IL-18基因融合H2Kk基因具有增强细胞免疫的相关报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供IL-18基因融合H2Kk基因在制备增强细胞免疫的细胞中的应用、细胞及制备方法，本发明将IL-18基因融合H2Kk基因后具有增强细胞免疫的作用。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了IL-18基因融合H2Kk基因在制备增强细胞免疫的细胞中的应用。

优选的，所述IL-18基因融合H2Kk基因后的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

本发明还提供了一种增强细胞免疫的K562细胞，将上述技术方案所述的IL-18基因融合H2Kk基因转化到K562细胞中，得到增强细胞免疫的K562细胞。

本发明还提供了一种上述技术方案所述的K562细胞的制备方法，包括以下步骤：

1)将跨膜表达RBD基因插入到质粒中，得到PB-S-RBD-NGFR质粒；

所述跨膜表达RBD基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

2)将所述IL-18基因融合H2Kk基因克隆到步骤1)得到的PB-S-RBD-NGFR质粒中，得到含融合基因质粒；

3)将所述步骤2)得到的含融合基因质粒电转化到K562细胞中，得到增强细胞免疫的K562细胞。

优选的，所述步骤1)质粒包括PB-713质粒。

优选的，所述跨膜表达RBD基因通过Bsu36I和BmgBI双酶切插入到质粒中。

优选的，所述步骤3)电转化的条件包括：电压560mV，电击时间30ms。

优选的，所述步骤3)含融合基因质粒的质量与K562细胞的数量比为7μg∶1×10⁷个。

本发明还提供了上述技术方案所述的增强细胞免疫的K562细胞在制备增强细胞免疫的疫苗中的应用。

本发明提供了IL-18基因融合H2Kk基因在制备增强细胞免疫的细胞中的应用、细胞及制备方法，IL-18是一种具有多向和多层次免疫调节功能的细胞因子，参与诱导免疫细胞活性的激活，从而介导细胞免疫，本发明将IL-18基因融合H2Kk基因后，使IL18表达在K562细胞膜表面，加强IL18对免疫细胞的刺激，具有增强细胞免疫的作用。

本发明实施例的结果显示：共表达IL18因子和H2Kk跨膜结构，可增强S蛋白RBD在小鼠体内细胞免疫(记忆T细胞)反应。

附图说明

图1为流式细胞术检测RBD蛋白的表达结果；