[发明专利]用于治疗中枢神经系统损伤的自体脂肪源干细胞的培养方法

说明书

本发明公开一种用于治疗中枢神经系统损伤的自体脂肪源干细胞的培养方法，第一步、脂肪采集，然后在无菌场所采集供者的脂肪，得到脂肪组织；第二步、获取和分离自体脂肪源干细胞：将脂肪组织与所取脂肪组织等体积的0.2％胶原酶磷酸缓冲液消化，清洗干净；过滤，去除未消化组织，离心5min，弃去上清液，获得干细胞；第三步、干细胞培养：将第二步得到的干细胞按1‑2×10⁴/cm²接种于培养瓶，加入10mL含体积分数15％胎牛血清的干细胞培养液，置于37℃、CO₂含量为5％的培养箱中培养，培养结束后离心，弃上清，向离心管中加入30mL含体积分数15％胎牛血清的干细胞培养液吹打干净混匀细胞，即得自体脂肪源干细胞。

技术领域

本发明属于干细胞培养技术领域，具体涉及用于治疗中枢神经系统损伤的自体脂肪源干细胞的培养方法。

背景技术

中枢神经系统包含大脑和脊髓，是所有感官知觉和运动输出的中心。中枢神经系统的修复和再生能力非常有限，因为受损/轴突切割的神经元和大多数横切的中枢神经轴突不可再生。中枢神经系统损伤包括创伤性脑损伤和脊髓损伤，是临床上创伤性致死和致残的主要原因，随着对干细胞研究的不断深入，越来越多的证据表明神经干细胞能一定程度提高脊髓损伤修复效果。其机理主要为神经干细胞旁分泌大量的神经再生因子，比如BDNF，NT-3，GDNF，NGF等等，所以神经干细胞移植其实主要以旁分泌的方式起作用。而且随着体内移植的细胞的不断死亡，分泌的因子浓度也逐渐减少。将体外培养的干细胞分泌到培养基中的众多再生因子分离、浓缩的方法，然后将再生因子复合到生物材料上应用于中枢神经系统修复中。

发明内容

本发明提供用于治疗中枢神经系统损伤的自体脂肪源干细胞的培养方法。

本发明要解决的技术问题：

中枢神经系统损伤包括创伤性脑损伤和脊髓损伤，是临床上创伤性致死和致残的主要原因，随着对干细胞研究的不断深入，越来越多的证据表明神经干细胞能一定程度提高脊髓损伤修复效果，本发明要解决的技术问题是提高自体脂肪源干细胞的培养效率，防止未分化细胞污染。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

用于治疗中枢神经系统损伤的自体脂肪源干细胞的培养方法，包括如下步骤：

第一步、脂肪采集，然后在无菌场所采集供者的脂肪，将得到脂肪进行处理，去除血管和纤维部分，然后进行绞碎处理，绞碎处理后用含体积分数0.1-1％庆大霉素的D-Hanks缓冲液冲洗，去除残留血液，得到脂肪组织；

第二步、获取和分离自体脂肪源干细胞：将脂肪组织与所取脂肪组织等体积的0.2％胶原酶磷酸缓冲液消化，在37℃温度条件下均匀震荡消化50-70min，再置于离心机中以1800-2000r/min的转速离心6-10min；将底层细胞用pH值为7.2-7.4的D-Hanks平衡盐液反复吹打，清洗干净；清洗下来的液体经100目筛网过滤，去除未消化组织，将滤液以1000r/min离心5min，弃去上清液，获得干细胞；