[发明专利]一种丝状真菌快速PCR模板的简易制备方法

说明书

本发明公开了一种丝状真菌快速PCR模板的简易制备方法，包括以下步骤：(1)培养待检测的丝状真菌，得到菌丝体；(2)挑取丝状真菌的菌丝放入盛有蒸馏水的玻璃试管中得到菌丝混合液；(3)将含有菌丝混合液的玻璃试管进行超声处理；(4)将超声处理过的菌丝混合液直接作为DNA模板进行PCR扩增。本发明的方法不需要液氮研磨，不需要添加任何提取试剂，简单快捷、省时省力。克服现有丝状真菌DNA提取时间长、添加试剂多、需要仪器多的缺点。本发明方法提取的DNA模板经PCR反应能够获得稳定、可靠的实验结果，成本低廉，效果良好，适合用于大批量样品快速分析，也适合于仪器条件不完善的实验室开展检测。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，特别涉及一种丝状真菌快速PCR模板的简易制备方法。

背景技术

PCR即聚合酶链式反应，作为分子生物学领域最基本的技术，广泛用于动物、植物和微生物的基因扩增和遗传分析，但是PCR的时间和成本受反应DNA模板的影响很大。目前，DNA的提取方法大多采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、十二烷基磺酸钠(SDS)法或者市场化的试剂盒。这些方法虽能获得较高质量DNA，但是需要加入很多试剂，并且操作步骤复杂耗时，增加了实验的时间和成本。因此，针对性改良反应的DNA模板实现快速PCR有重要应用价值。尽管在植物研究领域已经开发出Chelex-100提取法、碱裂解法、细胞壁裂解液法、机械破壁联合微波法等，这些方法一定程度上缩短了PCR模板的制备时间，但需要的试剂、仪器或步骤仍然很多，实验成本较高，难以适应大规模快速检测的需要。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种制备简单、快速、安全和经济的丝状真菌快速PCR模板的简易制备方法。

根据本发明的一个方面，提供了一种丝状真菌快速PCR模板的简易制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)以常规培养基培养待检测的丝状真菌，得到菌丝体；

(2)挑取丝状真菌的菌丝放入内部盛有蒸馏水的玻璃试管中得到菌丝混合液；

(3)将步骤(2)得到的含有菌丝混合液的玻璃试管进行超声处理；

(4)将步骤(3)超声处理过的菌丝混合液直接作为DNA模板进行PCR扩增。

在一些实施方式中，步骤(1)中待检测的丝状真菌采用固体培养基上培养或液体培养基中培养。

在一些实施方式中，步骤(2)进一步包括：挑取米粒大小的丝状真菌菌丝块20mg，放入盛有1ml水的玻璃试管中。

在一些实施方式中，步骤(3)进一步包括：将含有菌丝混合液的玻璃试管在40Hz超声波条件下处理5-10min。

在一些实施方式中，步骤(4)进一步包括：超声处理后的菌丝混合液直接作为DNA模板，添加到PCR反应体系中进行PCR扩增。

在一些实施方式中，所述的菌丝混合液的上清液直接作为DNA模板；或者菌丝混合液经50～65℃高温水浴10-15min后取上清液作为DNA模板；或者菌丝混合液经1000～6000rpm离心后取上清液作为DNA模板；或者菌丝混合液经50～65℃高温水浴10～15min，再经1000～6000rpm离心后取上清液作为DNA模板。

在一些实施方式中，所述步骤(4)进一步包括：吸取菌丝混合液的上清液1～3μl添加到PCR反应体系中进行PCR扩增。

在一些实施方式中，所述丝状真菌包括紫红曲霉(Monascus purpureus)和蝉棒束孢(Isaria cicadae)。