[发明专利]一种丝状真菌快速PCR模板的简易制备方法在审
| 申请号： | 202110031221.5 | 申请日： | 2021-01-11 |
| 公开（公告）号： | CN112813138A | 公开（公告）日： | 2021-05-18 |
| 发明（设计）人： | 赵杰宏;桂艳玲;韩洁;唐光甫;满海乔 | 申请（专利权）人： | 贵州中医药大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 贵阳易博皓专利代理事务所(普通合伙) 52116 | 代理人： | 张浩宇 |
| 地址： | 550025 贵州省*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 丝状 真菌 快速 pcr 模板 简易 制备 方法 | ||
1.一种丝状真菌快速PCR模板的简易制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)以常规培养基培养待检测的丝状真菌，得到菌丝体；
(2)挑取丝状真菌的菌丝放入内部盛有蒸馏水的玻璃试管中得到菌丝混合液；
(3)将步骤(2)得到的含有菌丝混合液的玻璃试管进行超声处理；
(4)将步骤(3)超声处理过的菌丝混合液直接作为DNA模板进行PCR扩增。
2.根据权利要求1所述的丝状真菌快速PCR模板的简易制备方法，其特征在于，步骤(1)中待检测的丝状真菌采用固体培养基上培养或液体培养基中培养。
3.根据权利要求1所述的丝状真菌快速PCR模板的简易制备方法，其特征在于，步骤(2)进一步包括：挑取米粒大小的丝状真菌菌丝块20mg，放入盛有1ml水的玻璃试管中。
4.根据权利要求1所述的丝状真菌快速PCR模板的简易制备方法，其特征在于，步骤(3)进一步包括：将含有菌丝混合液的玻璃试管在40Hz超声波条件下处理5-10min。
5.根据权利要求1所述的丝状真菌快速PCR模板的简易制备方法，其特征在于，步骤(4)中超声处理后的菌丝混合液直接作为DNA模板，添加到PCR反应体系中进行PCR扩增。
6.根据权利要求5所述的超声过的菌丝混合液直接作为DNA模板，其特征在于，所述的菌丝混合液的上清液直接作为DNA模板；或者菌丝混合液经50～65℃高温水浴10-15min后取上清液作为DNA模板；或者菌丝混合液经1000～6000rpm离心后取上清液作为DNA模板；或者菌丝混合液经50～65℃高温水浴10～15min，再经1000～6000rpm离心后取上清液作为DNA模板。
7.根据权利要求6所述的适量添加到PCR反应体系中进行PCR扩增，其特征在于，所述步骤(4)进一步包括：吸取菌丝混合液的上清液1～3μl添加到PCR反应体系中进行PCR扩增。
8.根据权利要求1所述的丝状真菌快速PCR模板的简易制备方法，其特征在于，所述丝状真菌包括紫红曲霉和蝉棒束孢。
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