[发明专利]一种Aureobasidin A的发酵制备方法及其培养基

说明书

本发明涉及微生物制药技术领域，具体涉及一种Aureobasidin A的发酵制备方法及其培养基，特别是适用于Aureobasidin A高产菌株CGMCC NO.20887的发酵制备方法及其培养基。上述方法和培养基，通过对工艺路线、工艺条件、种子培养基、发酵培养基(尤其是添加碳源调节因子，例如异丙基氯化镁)等进行优化，可显著提高Aureobasidin A的合成效率，维持产率稳定，延长产物合成周期，使Aureobasidin A的产量显著提升，可达5.5g/L以上，有利于Aureobasidin A的工业化生产。

技术领域

本发明涉及微生物制药技术领域，具体涉及一种Aureobasidin A的发酵制备方法及其培养基，特别是适用于Aureobasidin A高产菌株CGMCC NO.20887的发酵制备方法及其培养基。

背景技术

AureobasidinA是一种由9个氨基酸分子组成的环脂肽类抗生素，最早在1991年由日本Kazutoh Takesako团队从黑酵母Aureobasidiumpullulans的培养液中分离获得。后续研究证实AureobasidinA具有非常强的抗真菌能力，其在0.1～0.5μg/ml的低浓度下即可对酵母产生毒性。对其敏感的真菌种类包括：出芽酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)和黑曲霉(Aspergillus niger)。AureobasidinA的作用机制是抑制真菌生长所依赖的肌醇磷酰胺(inositol phosphorylceramide，IPC)合成酶的活性，干扰鞘脂合成，从而进一步杀死菌株。但是，AureobasidinA不会破坏DNA、RNA和蛋白质的合成。

目前，有关AureobasidinA生产技术的报道较少。1991年，KazutohTakesako团队最先从对马岛的叶子中分离到了Aureobasidiumpullulans菌种，经发酵培养后AureobasidinA的产量约为140μg/ml，通过培养基优化后(添加不同氨基酸)产量最高为312μg/ml(Kazutoh Takesako,Shigetoshi Mizutani,Hitoshi Sakakibara,et al.1996，Precursor Directed Biosynthesis ofAureobasidins)。2008年，Ahmed Abdel-Lateff等人从波塞多尼亚附近海域分离到一株海洋微生物Aureobasidium sp.，其发酵单位不超过300μg/ml。AureobasidinA因其较强的抗真菌活性，应用领域由潜在人用药逐步扩大到生物农药，因此，AureobasidinA高水平生产技术开发具有重要意义。

发明内容

为克服现有技术的不足，本发明提供一种Aureobasidin A的制备方法。

具体地，上述方法包括如下步骤：

(1)菌种活化；

(2)菌悬液制备；

(3)种子扩培；

(4)发酵。

具体地，上述步骤(1)包括：将Aureobasidin A生产菌株接种至固体培养基，培养，获得菌苔。

在本发明的一个实施例中，上述Aureobasidin A生产菌株为菌株CGMCCNO.20887。

具体地，上述固体培养基可以为任何适合真菌培养的培养基，例如，PDA培养基。

具体地，步骤(1)中的培养温度可以为20-30℃(例如21、22、23、24、25、26、27、28、29、30℃)，例如22-30℃，24-26℃，25℃。