[发明专利]基于适配体和声表面波的病毒分选富集检测系统及方法

说明书

本发明公开了一种基于适配体和声表面波的病毒分选富集检测系统及方法，将不同病毒的特异性适配体通过化学键结合修饰到尺寸不同的微球表面制备病毒捕获探针，该探针可以特异性的快速捕获病毒；在样品中加入上述探针进行充分孵育后，通入基于声表面波的微流控芯片中对捕获的不同病毒进行分选和富集；对分选富集得到的不同病毒与荧光标记的特异性适配体进行充分孵育，对病毒进行荧光标记；随后通过激光诱导荧光检测得到样品富集后的荧光强度，在一定范围内，样品中病毒数量与荧光强度呈线性相关，以达到病毒检测的目的。

技术领域

本发明属于生化检测技术领域，特别涉及一种基于适配体和声表面波的病毒分选富集检测系统及方法。

背景技术

病毒在自然界中广泛分布，其种类繁多、感染性高，主要通过呼吸道、消化道、皮肤和密切接触等途径侵入机体，导致的各种流行性疾病因其高发病率和死亡率对大众安全构成重大威胁。对于快速传播的病毒性疾病，阻止其传播的最有效办法就是对患者和感染者尽早进行早期诊断和早期隔离。

病毒感染者从感染病毒到出现临床症状存在一个潜伏期，在病毒感染潜伏期阶段缺乏特征性的症状，临床上难以进行早期诊断。而且处于潜伏期的病毒感染者体内收集的如血液、唾液、痰液、组织液、脑脊液、尿液等体液标本中病毒含量少，对标本直接进行细胞培养或者进行荧光定量PCR检测时，由于检测方法的局限性，很难检测出微量病毒，且存在一定的假阳性或假阴性。因此如何将微量的目标病毒从成分复杂的体液标本中进行分选和富集成为在病毒检测中必须要解决的技术问题和关键控制点，在完成高效富集的基础上还应考虑基质材料及其可能带来的干扰问题。目前的病毒分选技术主要依靠免疫磁珠法，其成本高、操作不便，难以广泛应用于临床。良好的病毒分选富集方法应满足以下特点：(1)操作快速、简便，易于推广使用； (2)富集倍数高，所需体液样本体积少；(3)回收率高且稳定；(4)受标本中其他成分影响较小；(5)可完成对多种病毒的分选和富集浓缩。

目前常用的病毒检测方法是细胞培养法和基于PCR技术的分子生物学方法，两种检测方法虽然常用，但仍存在一定的缺点。细胞培养法细胞培养周期较长、培养过程中易被细菌或真菌污染；多种病毒可同时在一种细胞系中繁殖，无法直接用细胞培养法对病毒进行血清型鉴定，且不能用于对不产生细胞病变作用的病毒的检测。基于PCR技术的分子生物学方法是以病毒核酸为检测对象，因此得到的阳性结果不能表征病毒的感染性。IPCR、PCR-ELISA等免疫学与PCR相结合的技术虽然具有高特异性、高灵敏度等特点，但由于免疫反应对抗体的纯度要求很高，制备高纯度的抗体操作复杂、耗时长、成本高、技术难度大，因此推广难度也很大。病毒的检测方法应满足以下特点：(1)操作简单、检测周期短；(2)灵敏度高、特异性强；(3)样品检出率高，假阴性率低；(4)能区分病毒的感染性；(5)可同时检测多种病毒或多种血清型的病毒。

因此开发一种检测种类多、富集倍数高、基体干扰少、检测成本低、操作简单、易于推广的方法就成为了对病毒感染性疾病进行有效早期诊断和早期隔离所面临的挑战。而鉴于病毒的致病性，需要开发更为简单、封闭的检测系统，从而尽可能减少检测人员与样本的高频接触。

发明内容

为了克服现有技术存在的缺陷，本发明提供一种基于适配体和声表面波的病毒分选富集检测系统及方法。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种基于适配体和声表面波的病毒分选富集检测系统，包括：

病毒捕获探针：用于对不同病毒进行特异性的快速捕获；

分选富集装置：用于对捕获的不同病毒进行分选和富集；

荧光标记探针：用于对分选富集得到的不同病毒进行荧光标记；

荧光检测系统：用于对标记后的不同病毒进行检测。

进一步地，所述的病毒捕获探针为通过化学键修饰了不同病毒特异性适配体的尺寸不同的微球。