[发明专利]用于序列特异性蛋白酶检测的分子开关

权利要求书

1.一种用于序列特异性蛋白酶检测的分子开关，其特征在于：

所述分子开关是一种融合蛋白，包括从N端到C端用接头依次连接的SmBiT、LgBiT、识别切割序列和HiBiT突变体；

所述识别切割序列为可被待检的序列特异性蛋白酶特异性识别并切割断裂的序列；

所述序列特异性蛋白酶为TEVp或caspase家族蛋白；

所述HiBiT突变体是在HiBiT的基础上，将第5氨基酸R突变为D、H、E、T或Y；

其中HiBiT的氨基酸序列如SEQ ID NO.81所示。

2.如权利要求1所述的分子开关，其特征在于：所述SmBiT的N端还通过接头连接了第二个所述识别切割序列，第二个识别切割序列另一端通过接头连接第二个所述HiBiT突变体；

所述HiBiT突变体是在HiBiT的基础上，将第5氨基酸R突变为D或E。

3.如权利要求1或2所述的分子开关，其特征在于：

所述识别切割序列N端的接头长度为10个氨基酸残基，C端的接头长度为6个氨基酸残基；所述氨基酸为甘氨酸和/或丝氨酸。

4.如权利要求3所述的分子开关，其特征在于：

所述N端的接头序列如SEQ ID NO.86所示，所述C端的接头序列如SEQ ID NO.85所示。

5.如权利要求1或2所述的分子开关，其特征在于：

所述SmBiT与LgBiT之间的接头长度为49个氨基酸残基。

6.如权利要求5所述的分子开关，其特征在于：所述SmBiT与LgBiT之间的接头序列如SEQ ID NO.83所示。

7.如权利要求1或2所述的分子开关，其特征在于：

当序列特异性蛋白酶为TEVp时，识别切割序列为：ENLYFQG；

当序列特异性蛋白酶为caspase 1时，识别切割序列为YVAD；

当序列特异性蛋白酶为caspase 3时，识别切割序列为DEVD或DMPD；

当序列特异性蛋白酶为caspase 6时，识别切割序列为VEID；

当序列特异性蛋白酶为caspase 8时，识别切割序列为LETD或FLTD；

当序列特异性蛋白酶为caspase 9时，识别切割序列为LEHD；

当序列特异性蛋白酶为caspase 10时，识别切割序列为IETD。

8.一种稳定表达权利要求1-7任一所述分子开关的细胞系。

9.权利要求1-7任一所述的分子开关在筛选序列特异性蛋白酶激活剂或抑制剂中的用途，其特征在于：所述序列特异性蛋白酶为TEVp或caspase家族蛋白。