[发明专利]基于小麦钾转运蛋白基因的功能标记开发方法

说明书

本发明公开了基于小麦钾转运蛋白基因的功能标记开发方法，包括以下操作步骤：先从小麦籽中提取小麦基因组DNA；然后对小麦基因组DNA用限制性内切酶进行酶切，得到小麦钾转运蛋白基因HAK1序列；再对小麦钾转运蛋白基因HAK1的5′端进行处理，对PCR扩增引物对进行染色标记，然后对小麦钾转运蛋白基因HAK1进行PCR扩增，获得PCR扩增产物；最后对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，染色后在紫外线下观察小麦钾转运蛋白基因HAK1。本发明便于深入研究小麦钾转运蛋白基因HAK1的功能，将对小麦的品质提高具有新的认识，便于提高小麦的产量。

技术领域

本发明涉及生物制品技术领域，特别涉及基于小麦钾转运蛋白基因的功能标记开发方法。

背景技术

小麦籽粒粉末为白色，有黄棕色麸皮。主要特征：淀粉粒主为扁平的圆形、椭圆形或圆三角状，直径30～40μm，侧面观呈双透镜状、贝壳状，宽11～19μm，两端稍尖或钝圆，脐点裂缝状，复粒少数，由2～4或多分粒组成。横细胞成片，细长柱形，长38～232μm，直径6～21μm，壁含珠状增厚。果皮表皮细胞类长方形或长多角形，长64～216μm，直径16～42μm，壁念珠状增厚。果皮中层细胞细长条形或不规则形，壁念珠状增厚。非腺毛单细胞，长43～950μm，直径11～29μm，壁厚5～11μm。秆直立，丛生，具6～7节，高60～100厘米，径5～7毫米。叶鞘松弛包茎，下部者长于上部者短于节间；叶舌膜质，长约1毫米；叶片长披针形。穗状花序直立，长5～10厘米（芒除外），宽1～1.5厘米；小穗含3～9小花，上部者不发育；颖卵圆形，长6～8毫米，主脉于背面上部具脊，于顶端延伸为长约1毫米的齿，侧脉的背脊及顶齿均不明显；外稃长圆状披针形，长8～10毫米，顶端具芒或无芒；内稃与外稃几等长。

小麦的颖果是人类的主食之一，磨成面粉后可制作面包、馒头、饼干、面条等食物，发酵后可制成啤酒、酒精、白酒（如伏特加），或生物质燃料。小麦是三大谷物之一，几乎全作食用，仅约有六分之一作为饲料使用。两河流域是世界上最早栽培小麦的地区，中国是世界较早种植小麦的国家之一。小麦作为我国三大粮食作物之一，约占全国粮食作物的1/4，不仅为人类提供了大量的热量，也是食物蛋白质的主要来源之一。据统计，全世界小麦蛋白质的总量约等于肉、蛋、奶蛋白质的总和。

钾离子是植物及微生物生长所必需的营养元素之一，广泛分布于有机体内，参与多种重要的生理过程。1994年，从小麦中首次克隆了一个钾离子转运体HAK1，并鉴定了植物HKI家族。1997年，通过三种不同的克隆策略，PCR、基因数据库分析和酵母功能互补，同时鉴定了植物K转运体的另-个家族: HAK或KUP /HAK/KT。在同一时期，通过基因数据库搜索动物钾离子通道新的植物对应物，鉴定了KC0通道。推测在钾离子转运中可能起作用的其它钾离子转运体和阳离子转运体也得到了鉴定；但就这些体系的大部分而言，可获得的信息很少，基本上来自于序列和进化关系分析。为此，深入研究小麦钾转运蛋白基因的功能，将对小麦的品质提高具有新的认识，便于提高小麦的产量。

发明内容

本发明的主要目的在于提供基于小麦钾转运蛋白基因的功能标记开发方法，可以有效解决背景技术中的问题。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

基于小麦钾转运蛋白基因的功能标记开发方法，包括以下操作步骤：

S1.提取小麦基因组DNA；

S2.对小麦基因组DNA用限制性内切酶进行酶切，得到小麦钾转运蛋白基因HAK1序列，

HAK1序列对：上链：TTGGATCCAGAAGGGGTGAAC，

下链：ACAAGATAGGTCGCATACTGG；

S3. 对小麦钾转运蛋白基因HAK1的5′端进行处理，对PCR扩增引物对进行染色标记，然后对小麦钾转运蛋白基因HAK1进行PCR扩增，获得PCR扩增产物，

PCR扩增引物对：上链：TGGAAGCGGAACGGATGAGGA，

下链：CTGCGGGAACGAGGGAGTGTC；