[发明专利]抗腹泻的复合微生物制剂的制备方法

说明书

抗腹泻的复合微生物制剂的制备方法，包括以下制备步骤：步骤一：将嗜酸乳杆菌冻干菌粉及干酪乳杆菌冻干菌粉分别用液体培养基在35℃～40℃的温度环境下活化2次；得到活化后的嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌；步骤二：将活化后的嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌分别划线接种至固体培养基上，而后将固体培养基放置于35℃～40℃的温度环境下培养24～30h，长出嗜酸乳杆菌与干酪乳杆菌的单个菌落；该抗腹泻的复合微生物制剂无毒、无害、无耐药性、无污染、绿色安全，不仅具有调节肠道微生态平衡、促进动物生长、产生消化酶及维生素提高饲料转化率和动物饲养效益的功效。

技术领域

本发明属于微生物制剂技术领域，涉及抗腹泻的复合微生物制剂的制备方法。

背景技术

近年来，伴随着养殖业集约化程度的迅速提高，疾病防控压力越来越大；养殖者为了降低发病率、节省养殖成本，通常会采用抗生素进行预防保健和促进生长。长期抗生素的大量滥用，导致动物非特异性免疫低下、易感和耐药菌株增加，使得疾病的控制与治疗更加困难，而且更容易引发动物肠道微生态紊乱、肠粘膜易损、药物残留、耐药性等一系列养殖难题，同时也给人类食品健康带来安全隐患，严重危害人们身体健康。

发明内容

为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

抗腹泻的复合微生物制剂的制备方法，包括以下制备步骤：

步骤一：将嗜酸乳杆菌冻干菌粉及干酪乳杆菌冻干菌粉分别用液体培养基在35℃～40℃的温度环境下活化2次；得到活化后的嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌；

步骤二：将活化后的嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌分别划线接种至固体培养基上，而后将固体培养基放置于35℃～40℃的温度环境下培养24～30h，长出嗜酸乳杆菌与干酪乳杆菌的单个菌落；

步骤三：在无菌的环境下用接种环从嗜酸乳杆菌与干酪乳杆菌的单个菌落中分别取1～2环于50ml～100ml的种子液体培养基中，而后将其置于35℃～40℃的厌氧环境中培养24～30h，制得一级种子液；

步骤四：按照接种量的5％～8％将一级种子液接于500ml～1000ml种子液体培养基中，而后将其置于35℃～40℃的厌氧环境中培养24～30h，制得二级种子液；

步骤五：发酵培养，得到复合微生物制剂。

作为本发明进一步的方案：所述步骤一中的液体培养基为MRS液体培养基。

作为本发明进一步的方案：所述步骤二中的固体培养基为MRS固体培养基。

作为本发明进一步的方案：所述步骤五发酵培养具体包括：按接种量的5％～8％以1:1的比例取单个菌落中的嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌同二级种子液一起接于液体发酵培养基中在35℃～40℃的厌氧环境下培养32～48h得到复合微生物制液剂。

作为本发明进一步的方案：所述步骤四中的种子液体培养基由以下百分比材料混合而成：葡萄糖1％、糖蜜2％、麦芽粹取物1％、乳清粉1％、蛋白胨1％、酵母提取物0.5％、磷酸氢二钾0.2％、醋酸钠0.22％、硫酸镁0.02％，其余为水。

作为本发明进一步的方案：所述液体发酵培养基由以下百分比材料混合而成：糖蜜8％、酵母提取物1％、乳清粉0.5％、麦芽粹取物0.5％、磷酸氢二钾0.2％、硫酸镁0.02％、碳酸钙0.5％、其余为水。

作为本发明进一步的方案：所述步骤五发酵培养具体包括：按接种量的5％～8％以1:1的比例取单个菌落中的嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌同二级种子液一起与固态发酵营养液混均，混均后再与固态发酵培养基搅拌均匀，而后将其置于35℃～40℃的厌氧环境下培养48～72h得到固态发酵培养物得到复合微生物固态体，而后将该复合微生物固态体进行干燥分散得到复合微生物制粉剂。

作为本发明进一步的方案：所述固态发酵培养物的干燥温度为50～60℃，干燥后的水分需在12％以下，粉碎的粒径为30目筛。