[发明专利]一种用于DNA聚合酶识别特异性的缓冲液及其应用

说明书

本发明提供一种用于DNA聚合酶识别特异性的缓冲液及其应用，所述缓冲溶液包括少于四种碱基类型的dNTPs或少于四种碱基类型的dNTPs的类似物、包含SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的DNA聚合酶。通过本发明制备的用于DNA聚合酶识别特异性的缓冲液，可支持含有特定三个或三个以下碱基类型的目标序列的扩增。当目标序列中含有第四个碱基时，扩增反应将终止，因而可明显地控制DNA序列扩增过程产生的非特异性扩增。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于DNA聚合酶识别特异性的缓冲液及其应用。

背景技术

缓冲溶液是指具有能够维持PH相对稳定性能的溶液。在缓冲溶液中，pH值在一定的范围内不因稀释或外加少量的酸或碱而发生显著的变化，缓冲溶液依据共轭酸碱对及其物质的量不同而具有不同的pH值和缓冲容量。在生化研究工作中，常常需要使用缓冲溶液来维持实验体系的酸碱度。研究工作的溶液体系pH值的变化往往直接影响到DNA聚合酶研究工作的成效。如果DNA聚合酶实验体系的pH值变动或大幅度变动，酶活性就会下降甚至完全丧失，所以配制缓冲溶液是一个不可或缺的关键步骤。尽管DNA聚合酶的缓冲溶液对于DNA聚合酶的活性发挥尤其重要，但是，具体到，如何研发一种特异性识别特定碱基序列的DNA聚合酶的缓冲溶液，能避免DNA聚合酶扩增过程存在的非特异性扩增，在世界范围内还处于一个研究难题。

此外，现有的DNA聚合酶适配的缓冲溶液，在样本中进行聚合酶链式反应时，在样本缓冲溶液中需添加各种dNTPs，才能完成特异性碱基序列识别、扩增或检测。但是对于一些目标序列中含有少于四种碱基的序列的识别过程中，现有的DNA聚合酶普遍存在特异性碱基序列识别的难题，无法有效地扩增出特异性碱基序列。尤为重要的是，现有的DNA聚合酶适配的缓冲溶液，无法完成单一反应体系内超多重PCR的高效和准确的扩增。

因此，亟需开发一种能够用于特异性碱基序列识别的DNA聚合酶的缓冲液。

发明内容

为解决现有技术存在的问题，本发明提供一种用于DNA聚合酶识别特异性的缓冲液、及其制备方法与应用，可支持含有特定三个或三个以下碱基类型的目标序列的扩增。当目标序列中含有第四个碱基时，扩增反应将终止。因此，本发明可明显地控制DNA序列扩增过程产生的非特异性扩增，支持完成单一反应体系内超多重PCR的高效和准确的扩增。

本发明第一方面提供一种用于DNA聚合酶识别特异性的缓冲溶液，其特征在于，所述缓冲溶液包括少于四种碱基类型的dNTPs或少于四种碱基类型的dNTPs的类似物。通过本技术方案，可明显地控制DNA序列扩增过程产生的非特异性扩增。

优选地，如前所述的缓冲溶液，包括DNA聚合酶，所述DNA聚合酶包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。通过本技术方案，可明显地控制DNA序列扩增过程产生的非特异性扩增，支持完成单一反应体系内超多重PCR的高效和准确的扩增。

优选地，如前所述的缓冲溶液，包括DNA聚合酶，所述的DNA聚合酶蛋白序列包含在一个或多个位置发生氨基酸取代的SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；其中，所述一个或多个位置选自SEQ ID No:1所示的氨基酸序列中第6位、第8位、第10位、第104位、第205位或其任意组合。通过本技术方案，可明显地控制DNA序列扩增过程产生的非特异性扩增，支持完成单一反应体系内超多重PCR的高效和准确的扩增。当目标序列中含有第四个碱基时，扩增反应将终止。因此，本发明可明显地控制DNA序列扩增过程产生的非特异性扩增。

优选地，如前所述的缓冲溶液包括包括DNA聚合酶，所述的DNA聚合酶蛋白序列包含在多个位置发生氨基酸取代的SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，其中，所述多个位置选自SEQ ID No:1所示的氨基酸序列中第6位、第8位、第10位、第104位和第205位全部发生氨基酸取代。通过本技术方案，可明显地控制DNA序列扩增过程产生的非特异性扩增，支持完成单一反应体系内超多重PCR的高效和准确的扩增。