[发明专利]引物组合、探针组合以及人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒

说明书

引物组合、探针组合以及人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒。本发明涉及生物检测领域，特别涉及一种用于诊断高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染的PCR荧光探针检测方法，利用本方法制备的试剂盒采用磁珠法提取宫颈脱落细胞中的人乳头瘤病毒核酸，并进行实时荧光聚合酶链反应，对样本中的14种HPV DNA型别进行检测并分型HPV16/18型。同时联合细胞学检查进行女性宫颈癌筛查。本试剂盒可用于患者宫颈细胞样本中高危型人乳头瘤病毒的定性检测，在检测HPV31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68的同时分型鉴定HPV16和HPV18型。本试剂盒定性检测患者宫颈细胞中的高危型HPV DNA，确定患者是否需要行阴道镜检查。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别涉及引物组合、探针组合以及人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒。

背景技术

人乳头瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)是一类分子量较小的无包膜的双链环状DNA病毒，专性侵染和寄生人体生殖器官及其它组织器官的上皮细胞。目前已经鉴定出的HPV约有150种亚型，根据其致病性大小分为低危型和高危型。低危型HPV主要引起肛门皮肤及男性外生殖器、女性大小阴唇、尿道口、阴道下段的外生性疣类病变和低度子宫颈上皮内瘤。高危型HPV除可引起外生殖器疣外，更重要的是引起外生殖器癌、宫颈癌及高度子宫颈上皮内瘤变，其病毒亚型主要有HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68型。

HPV在人群中极易传播扩散，可通过直接或间接接触交叉传染，其感染部位隐蔽，发病隐匿，不易早期发现，可致多种增生性病变，在女性生殖系统所引起的最常见的恶性肿瘤为宫颈癌。宫颈癌是妇女中最常见的恶性肿瘤，主要发生于多产妇女的早期绝经期。每年全世界有约19万人死于宫颈癌，而其中超过3/4的死亡发生在发展中国家。宫颈癌的发生率在所有癌症中排名第七，而在妇女中排名第三，仅次于乳腺癌和大肠癌。在发展中国家，少于50％的患宫颈癌的妇女能存活5年以上，而在发达国家，5年存活率是66％左右。在过去的10年中，估计全世界每年有将近371000例新的侵入性宫颈癌，占到整个妇女癌症的10％。宫颈癌高发病区主要位于中南美洲、南非、东非和加勒比地区，这些地区每年的平均发病率达到万分之四。东欧和北美的发病率低于每年万分之三，但在巴西东北部，发病率要比北美高10倍，一生中累积风险性可高达10％。

由于感染HPV是引起宫颈癌的一大原因，所以现在这一研究已成为宫颈癌预防的前沿学科。在西方工业化国家，对于所有的恶性肿瘤疾病，宫颈癌也许是公共预防措施做得最好的例子。对宫颈癌的病因学研究可知，高危HPV持续感染是子宫颈癌的主要致病因素，99.7％宫颈癌患者存在HPV感染。临床研究显示，从HPV的持续感染到一般的宫颈癌前病变并最终发展为宫颈癌大约需要8-10年。因此筛查是目前预防和早期诊断宫颈癌的主要手段。在检出的所有型别中主要有HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68型。其中HPV16和HPV 18这两种高危型别与70％的宫颈癌病例相关。早期宫颈病变的治疗效果远比宫颈癌的治疗效果要好得多，因此，快速、准确的检测出HPV高危型的感染，且能够对16型和18型准确分型，对于早期治疗和降低宫颈癌的发病率和死亡率等具有重要的意义。

现有宫颈癌的筛查技术可分两类，基于形态学的方法是在细胞或组织水平检查以识别不正常，基于分子生物学的方法是检查子宫颈上皮瘤的宫颈癌的标志物。进一步区分这些方法可根据他们释放借助于显微镜或物理和电光学的特性。本文总结了当前各种宫颈癌筛查的方法，而其中最关联或最有先兆的方法总结在如下几节。

宫颈巴氏(Pap)细胞学：Pap检测是最早的癌症检测方法之一，毫无疑问，它同时也是现代医学中最有成效的一种方法。Pap检测主要是检查宫颈癌先兆，通过重复检测，可以密切监测可疑的或低度异常，或提议病人立即进行阴道镜、细胞切片检查，并对高度或严重的损害进行治疗。通过Pap检测预防侵入性宫颈癌，可在它还只是上皮组织时就阻止其恶性发展。