[发明专利]引物组合、探针组合以及人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒

权利要求书

1.引物探针组合，其特征在于，包括：

引物或其组合；和/或

探针或其组合；

(1)所述引物或其组合，具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：

Ⅰ、具有SEQ ID No.1～30任意所示的核苷酸序列；或

Ⅱ、具有SEQ ID No.1～30任意所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列或具有SEQ ID No.1～30任意所示的核苷酸序列功能相近的核苷酸序列；或

III、与SEQ ID No.1～30任意所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列或具有SEQ ID No.1～30任意所示的核苷酸序列功能相近的核苷酸序列；或

IV、如Ⅰ、Ⅱ或III所示序列的互补序列；

(2)所述探针或其组合，具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：

V、具有SEQ ID No.31～37任意所示的核苷酸序列；或

VI、具有SEQ ID No.31～37任意所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列或具有SEQ ID No.31～37任意所示的核苷酸序列功能相近的核苷酸序列；或

VII、与SEQ ID No.31～37任意所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列或具有SEQ ID No.31～37任意所示的核苷酸序列功能相近的核苷酸序列；或

VIII、如V、VI或VII所示序列的互补序列。

2.如权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，所述探针或其组合包括：

12个型别探针，具有SEQ ID No.31～34任意所示的核苷酸序列；所述12个型别包括HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68；

16型探针，具有如SEQ ID No.35所示的核苷酸序列；

18型探针，具有如SEQ ID No.36所示的核苷酸序列；

内标探针，具有如SEQ ID No.37所示的核苷酸序列。

3.如权利要求1或2所述的引物探针组合在制备检测人乳头瘤病毒或对人乳头瘤病毒分型的试剂或试剂盒中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述人乳头瘤病毒包括高危型人乳头瘤病毒HPV16型、HPV18型、HPV31型、HPV33型、HPV35型、HPV39型、HPV45型、HPV51型、HPV52型、HPV56型、HPV58型、HPV59型、HPV66型、HPV68型中的一种或多种。

5.试剂，其特征在于，包括如权利要求1或2所述的引物探针组合以及可接受的助剂。

6.如权利要求5所述的试剂，其特征在于，包括PCR第一反应液和PCR第二反应液；

以体系总量为20μL计，所述PCR第一反应液包括：如权利要求1或2所述的引物探针组合中的引物或探针的含量分别为0.1～0.5μM；Trinice 30～100mM，KOAc 100～150mM，Tween20 0.005％～0.1％(v/v)，甘油0.1％～1％(v/v)，NaN30.1％～5％(w/v)，UDG酶1～10μL，rTth 1～5μL，dNTPs 0.11～0.6mM，DMSO 5～50μL，余量为超纯水；

以体系总量为10μL计，所述PCR第二反应液包括：醋酸锰1～6mM，醋酸镁2～10mM，NaN30.01％～0.1％(w/v)，余量为超纯水。

7.如权利要求5或6所述的试剂在制备检测人乳头瘤病毒或对人乳头瘤病毒分型的试剂盒中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述人乳头瘤病毒包括高危型人乳头瘤病毒HPV16型、HPV18型、HPV31型、HPV33型、HPV35型、HPV39型、HPV45型、HPV51型、HPV52型、HPV56型、HPV58型、HPV59型、HPV66型、HPV68型中的一种或多种。

9.试剂盒，其特征在于，包括如1或2所述的引物探针组合或如权利要求5或6所述的试剂。