[发明专利]一种基于DNA-PAINT的细胞膜上PD-L1蛋白检测方法及序列

权利要求书

1.一种基于DNA-PAINT的细胞膜上PD-L1蛋白检测方法，其特征在于：包括以下步骤，

(1)将PD-L1抗体与DBCO-sulfo-NHS进行偶联、孵育、提纯；，得到DBCO-sulfo-NHS偶联的抗体；

(2)将DNA锚链与所述DBC0-sulfo-NHS偶联的抗体进行共孵育，提纯后获得DNA偶联的抗体，所述DNA锚链的序列如SEQ NO.1所示；

(3)将所述DNA偶联的抗体加入预处理的细胞中进行孵育，之后进行冲洗，冲洗结束后加入DNA成像链并孵育，进行DNA-PAINT超分辨成像，所述DNA成像链的序列如SEQ NO.2所示。

2.根据权利要求1所述基于DNA-PAINT的细胞膜上PD-L1蛋白检测方法，其特征在于：步骤(1)中，所述将PD-L1抗体与DBCO-sulfo-NHS进行偶联、孵育、提纯，其为将1μL 0.443mg/mL的PD-L1抗体和8μL 100mM的DBCO-sulfo-NHS加到400μL的PBS溶液中，铝箔包裹后放入摇床中孵育2小时，设置孵育温度为4℃，所述提纯，其为将孵育后的溶液离心，然后加入PBS溶液重悬提纯的溶液中，以同样的参数再次离心。

3.根据权利要求1所述基于DNA-PAINT的细胞膜上PD-L1蛋白检测方法，其特征在于：步骤(2)中，所述将DNA锚链与所述DBC0-sulfo-NHS偶联的抗体进行共孵育，其为用铝箔包裹放入摇床中在室温下孵育90min。

4.根据权利要求1所述基于DNA-PAINT的细胞膜上PD-L1蛋白检测方法，其特征在于：步骤(3)中，所述预处理的细胞包括MCF-7细胞、MB-231细胞的一种或几种，所述将所述DNA偶联的抗体加入预处理的细胞中进行孵育的条件为4℃环境下孵育12小时以上。

5.根据权利要求1或4所述基于DNA-PAINT的细胞膜上PD-L1蛋白检测方法，其特征在于：步骤(3)中，所述进行DNA-PAINT超分辨成像，其采用的激光为405nm、642nm，曝光时间为100ms，采集5000帧以上。

6.一种用于PD-L1蛋白检测的序列，其特征在于：包括DNA锚链和DNA成像链，所述DNA锚链的序列如SEQ NO.1所示，所述DNA成像链的序列如SEQ NO.2所示。