[发明专利]无标记N-聚糖定量方法

权利要求书

1.一种定量重组蛋白的糖基化谱的方法，其包括在没有任何标记的情况下分析一种或多种N-连接聚糖，其中所述N-连接聚糖在所述分析之前通过酶从所述重组蛋白释放。

2.一种定量重组蛋白的糖基化谱的方法，其包括在没有任何荧光团的情况下分析所述一种或多种N-连接聚糖，其中所述N-连接聚糖在所述分析之前通过酶从所述重组蛋白释放。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述重组蛋白纯度为至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述分析包括在包括柱的色谱法期间分离一种或多种N-连接聚糖。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述柱是混合模式柱。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其中所述分离使用一种或多种流动相进行。

7.根据权利要求4至6中任一项所述的方法，其中所述柱是混合模式多孔石墨碳(PGC)柱。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述酶包括肽N-糖苷酶F(PNGaseF)。

9.根据权利要求8所述的方法，其中将所述酶与所述重组蛋白一起孵育，其中所述一种或多种N-连接聚糖在所述分离之前从所述重组蛋白释放。

10.根据权利要求9所述的方法，其中在缓冲液中稀释所述酶。

11.根据权利要求4至10中任一项所述的方法，其中分离的所述一种或多种N-连接聚糖通过质谱仪、ELSD、NQAD或折射率检测器来测量。

12.根据权利要求11所述的方法，其中分离的所述一种或多种N-连接聚糖通过电雾式检测器(CAD)来测量。

13.根据权利要求4至12中任一项所述的方法，其中所述色谱法包括第一流动相和第二流动相，其中所述第一流动相和所述第二流动相是不同的。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述第一流动相包含水。

15.根据权利要求13或14所述的方法，其中所述第二流动相包含乙腈。

16.根据权利要求13至15中任一项所述的方法，其中所述第一流动相包含甲酸(FA)、三氟乙酸(TFA)、三乙胺(TEA)或其任何组合。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述第一流动相包含0.1％FA。

18.根据权利要求13至17中任一项所述的方法，其中所述第二流动相包含甲酸(FA)、三氟乙酸(TFA)、三乙胺(TEA)或其任何组合。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述第二流动相包含0.1％FA。

20.根据权利要求4至19中任一项所述的方法，其中所述分离在低于70℃的温度下进行。

21.根据权利要求20所述的方法，其中所述温度为约50℃至约70℃、约50℃至约60℃、约60℃至约70℃、约55℃至约65℃、约55℃至约60℃、约60℃至约65℃、约65℃至约70℃、约50℃至约55℃。