[发明专利]用于将多核苷酸递送至外泌体中的核酸构建体

权利要求书

1.一种用于将外源核苷酸序列靶向到外泌体的pre-miRNA，其中所述pre-miRNA包含外源核苷酸序列和茎环结构，其中所述茎包含至少一个摆动对。

2.根据权利要求1所述的pre-miRNA，其中所述pre-miRNA包含：

a.5’端，其包含至少一个摆动对；和/或

b.外源核苷酸序列，其包含一个或多个缺失和/或错配；和/或

c.3’端，其包含环和至少一个摆动对。

3.根据前述权利要求中任一项所述的pre-miRNA，其包含所述结构A-B-C，其中：

a.A是pre-miRNA 5’端，其中所述pre-miRNA 5’端包含与pre-miR-21的所述5’端至少50％、60％、70％、80％、90％或更高的序列同一性；

b.B是pre-miR-21中非天然存在的外源核苷酸序列；以及

c.C是pre-miRNA 3’端，其中所述pre-miRNA 3’端包含与pre-miR-21的所述3’端至少50％、60％、70％、80％、90％或更高的序列同一性，

任选地其中所述pre-miRNA包含与pre-miR-21的所述序列至少20％、30％、40％或更高的总序列同一性。

4.根据前述权利要求中任一项所述的pre-miRNA，其中所述pre-mRNA包含以下所述结构：

其中：

N是任何核苷酸并且与n杂交，任选地通过Watson-Crick配对；

N_x是与n杂交的任何长度的核苷酸序列，任选地其中N_x1、N_x2和N_x3具有不同的长度；

M是核苷酸，并且与m错配或不杂交；

D是核苷酸，并且仅存在于所述茎环结构的一侧上；

W是核苷酸，并且与w形成摆动对；

L是核苷酸，其形成环结构并且能与l杂交；以及

其中所述pre-miRNA包含所述结构A-B-C，其中：

[…]是A，miR-21 5’端结构模拟物；

{…}是B，外源核苷酸序列；以及

(…)是C，miR-21 3’端结构模拟物。

5.根据权利要求4所述的pre-miRNA，其中N_x1包含4至12个核苷酸，N_x2包含2至8个核苷酸，并且N_x3包含2至8个核苷酸。

6.根据前述权利要求中任一项所述的pre-miRNA，其中：

所述茎环结构包含60至80个核苷酸的总长度；任选地其中所述外源核苷酸序列的长度为19-25个核苷酸；和/或

其中所述pre-miRNA包含所述外源核苷酸序列上游的转录因子调控启动子，任选地其中所述启动子由TATA结合蛋白、激活蛋白1(AP-1)、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)、血清反应因子(SRF)、信号转导子和转录激活子3(STAT3)、GC-盒结合蛋白、E26转化特异性(ETS)家族转录因子，任选地PU.1、核因子I(NFI)转录因子或p53中的一种或多种调控。

7.根据前述权利要求中任一项所述的pre-miRNA，其中所述pre-mRNA包含以下所述结构：

其中：

N是任何核苷酸并且与n杂交，任选地通过Watson-Crick配对；

M是核苷酸，并且与m错配或不杂交；

D是核苷酸，并且仅存在于所述茎环结构的一侧上；

W是核苷酸，并且与w形成摆动对；

L是核苷酸，其形成环结构并且能与l杂交；以及

其中所述pre-miRNA包含所述结构A-B-C，其中：

[…]是A，pre-miRNA 5’端；

{…}是B，外源核苷酸序列；以及

(…)是C，pre-miRNA 3’端。