[发明专利]一种培养用于治疗用途的肿瘤浸润淋巴细胞的改进方法

说明书

本发明涉及通过将含有切除的TIL的肿瘤片段与免疫检查点抑制剂共培养，在体外重振耗竭的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)，用已知的其他白细胞介素刺激TIL以恢复T细胞耗竭，和/或抑制调节性T细胞分泌因子(例如IL‑10)的作用，从而创造有利的肿瘤微环境(TME)，使得与目前建立的TIL扩增方案相比，在这种肿瘤微环境中，耗竭的T细胞可以更快扩增且扩增数量更多。

技术领域

本发明涉及通过将含有切除的TIL的肿瘤片段与肿瘤微环境(TME)刺激剂，例如免疫检查点抑制剂(ICI)共培养，在体外重振耗竭的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)，用已知的其他白细胞介素刺激TIL以恢复T细胞耗竭，和/或抑制调节性T细胞分泌因子的作用(例如抑制IL-10)，从而创造有利的肿瘤微环境，使得与目前建立的扩增方案相比，在这种肿瘤微环境中，耗竭的T细胞可以更快扩增且扩增数量更多。

背景技术

肿瘤浸润淋巴细胞与接受免疫治疗，例如使用针对CTLA-4和PD-1/PD-L1的免疫检查点抑制剂(ICI)的癌症患者的预后和无进展生存期改善有关。

然而，仍然只有一小部分患者对此类疗法表现出持久、长期的反应，因为许多其他因素似乎与下调免疫反应中的肿瘤微环境有关。关键因素之一似乎是T细胞耗竭，导致抗原特异性T细胞出现物理消除和/或功能障碍。与这种耗竭现象有关的因素涉及肿瘤细胞、淋巴和单核细胞上表达的表面标志物以及肿瘤微环境(TME)中调节性T细胞和NK细胞分泌的可溶性分子。但是，TME中也明显缺乏干扰素γ和IL-2等刺激因子。

逆转T细胞耗竭是开发新型ICI的关键目标，无论是作为单一疗法还是与目前成熟的疗法相结合。然而，由于这些靶点通常还负责诱导免疫耐受以避免自身免疫反应，因此抑制剂的全身给药可能会导致严重的副作用。此外，给予T细胞刺激分子如IL-2也会导致严重的甚至有时是致命的副作用，因此需要由熟练的临床医生进行管理。已经采取了一些方法将候选药物局部施用到肿瘤中，从而可能避免全身性的副作用。然而，由于癌细胞分布在许多转移性患者的全身各处，因此这种方法在这种情况下成功的可能性值得怀疑。

肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)疗法的使用已经表现出了显著的临床益处，各种恶性肿瘤(如转移性黑色素瘤、头颈癌和宫颈癌)患者中，客观缓解率高达55％，完全缓解率高达20％。简而言之，这种疗法利用自体T淋巴细胞的体外扩增，具体方式为：一开始利用IL-2、抗CD3抗体和饲养细胞刺激来自切除的肿瘤的片段，从而在促进肿瘤抑制后，向已经接受淋巴细胞疗法的患者重新施用T细胞，使这些细胞生长为数十亿个。

TIL治疗成本高且花费时间长。因此，优化现有方法并确定缩短TIL扩增持续时间、提高扩增速率并获得更有利表型的方法将是有利的。

发明内容

本发明涉及一种通过将肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)扩增到TIL治疗群体中来促进哺乳动物癌症消退的方法，该方法包括(a)通过从哺乳动物身上切除下来的肿瘤中获得第一TIL群体来培养自体T细胞，(b)通过在包含IL-2和一种或多种TME刺激剂的细胞培养基中培养第一TIL群体进行第一次扩增以产生第二TIL群体；(c)通过用额外的IL-2、抗CD3抗体和抗原呈递细胞(APC)补充第二TIL群体的细胞培养基来进行第二次扩增，以产生第三TIL群体，其中第三TIL群体是治疗性群体；以及(d)在给予非清髓性淋巴细胞清除化学疗法后，向哺乳动物施用治疗性T细胞群体，其中向哺乳动物施用T细胞，由此促进哺乳动物癌症的消退。

本发明的另一方面涉及治疗患有癌症的受试者的方法，该方法包括施用扩增的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)，包括：(a)通过从哺乳动物身上切除下来的肿瘤中获得第一TIL群体来培养自体T细胞，(b)通过在包含IL-2和一种或多种TME刺激剂的细胞培养基中培养第一TIL群体进行第一次扩增以产生第二TIL群体；(c)通过用额外的IL-2、抗CD3抗体和抗原呈递细胞(APC)补充第二TIL群体的细胞培养基来进行第二次扩增，以产生第三TIL群体，其中第三TIL群体是治疗群体；以及(d)在给予非清髓性淋巴细胞清除化学疗法后，向哺乳动物施用治疗性T细胞群体，其中向哺乳动物施用T细胞，由此促进哺乳动物癌症的消退。