[发明专利]用于荚膜多糖聚核糖基-核糖醇-磷酸(PRP)的生产、回收和纯化的方法及其用途

权利要求书

1.用于培养b型流感嗜血杆菌用于生产PRP的方法，其特征在于包括以下步骤：

a)制备来自荚膜多糖聚核糖基-核糖醇-磷酸(PRP)的生产者，b型流感嗜血杆菌的菌株GB3291的冻干物的批次；

b)将细菌悬浮液分配在冷冻小瓶中；

c)由储存在液氮中的所述批次的所述细菌悬浮液制备预接种物；

d)将一定体积的所述细菌悬浮液转移至装有50ml的含有植物来源的蛋白胨和酵母提取物的复合培养基的烧瓶中；

e)将样品在37℃下在厌氧室中保持静态7-10h；

f)以适当体积将样品转移至2L接种物烧瓶中，使得400mL的所得悬浮液呈现等于0.025的DO540；

g)在37℃下孵育并搅拌所述悬浮液“过夜”；

h)转移适当的悬浮液体积，使得生物反应器中存在的初始培养基的初始DO540是0.1；

i)在培养20小时具有约20的DO540之后完成所述方法；

j)所述培养完成之后添加生长抑制剂至0.2％的最终浓度，并且然后开始多糖纯化方法。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将所述细菌悬浮液分配在冷冻小瓶中，优选1mL的冷冻小瓶，在-20℃下冷冻12小时，并且然后在液氮中维持直至使用的时刻。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤e)之后，在540nm下测量所述样品的光密度(DO540)，并且在步骤g)中，将所述悬浮液在回旋振荡器中在250RPM和37℃下搅拌至少12小时，直到DO540达到5至7，并且在步骤j)中，所述生长抑制剂选自叠氮化钠、硫柳汞(C₉H₉HgNaO₂S)，优选地，所述生长抑制剂是叠氮化钠，并且，其中细菌培养以简单的分批方案进行，直到发生培养基中葡萄糖的完全耗尽，并且其中在批次阶段开始时，通过以恒定流量添加补料培养基来补料。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述初始培养基包含：

10g/l的大豆胨；

5.0g/l的UF酵母提取物；

5.0g/l的葡萄糖；

5.0g/l的NaCl；

2.5g/l的K₂HPO₄；

10g/l的Na₂HPO₄；

5.8g/l的NaH₂PO₄·H₂O；

0.015g/l的NAD；以及

0.03g/l的氯化血红素。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述补料培养基包含：

10g/l的大豆胨；

100.0g/l的UF酵母提取物；

200.0g/l的葡萄糖；

5.0g/l的NaCl；

2.5g/l的K₂HPO₄；

10g/l的Na₂HPO₄；

5.8g/l的NaH₂PO₄·H₂O；

0.015g/l的NAD；以及

0.03g/l的氯化血红素。