[发明专利]噬菌体环化测定

权利要求书

1.一种用于确定在遗传展示系统上展示的肽配体的环化程度的方法，其中所述肽配体包含在两个或多个氨基酸残基处与分子支架共价连接的多肽，其包括步骤：

(a)将所述遗传展示系统上展示的多肽暴露至所述分子支架，其中所述多肽在所述两个或多个氨基酸残基处包含两个或多个肽反应性基团，其与分子支架在两个或多个支架反应性基团处形成共价键以得到所述肽配体；

(b)从所述遗传展示系统中去除未反应的分子支架；

(c)将所述遗传展示系统上展示的所述肽配体暴露于第一探针，其中所述第一探针与所述肽配体上的第一未偶联的反应性基团结合；和

(d)测量所述肽配体上的第一未偶联的反应性基团。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一探针包含或可连接至第一信号传导基团，所述第一信号传导基团直接或间接产生第一信号以指示所述肽配体上的所述第一未偶联的反应性基团。

3.根据权利要求2所述的方法，其进一步包括在步骤(c)之后将在所述遗传展示系统上展示的所述肽配体暴露至第二探针，其中所述第二探针与所述遗传展示系统结合并且包含或可连接至第二信号传导基团。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述第二信号传导基团由所述第一信号触发以产生第二信号。

5.根据权利要求3所述的方法，其中所述第二信号传导基团产生第二信号，所述第二信号触发所述第一信号传导基团产生所述第一信号。

6.根据权利要求4所述的方法，其中所述第一信号传导基团包含第一光敏剂，其被配置为将环境氧分子转化为单线态氧分子，并且所述第二信号传导基团包含第一化学发光分子，其被配置为被单线态氧分子激发。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述第二信号传导基团进一步包含第一荧光基团，所述第一荧光基团被配置为被所述第一化学发光分子的化学发光激发。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述第一未偶联的反应性基团是两个或多个肽反应性基团中的一个。

9.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述第一未偶联的反应性基团是两个或多个支架反应性基团中的一个。

10.根据权利要求9所述的方法，其中步骤(c)进一步包括在将所述遗传展示系统暴露于所述第一探针之后，用还原剂处理所述遗传展示系统。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述还原剂是TCEP。

12.根据权利要求9至11中任一项所述的方法，其中通过在步骤(c)中使用第三探针进一步重复所述方法，所述第三探针结合第二未偶联的反应性基团，其中所述第二未偶联的反应性基团是两个或多个肽反应性基团之一。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述第三探针包含或可连接至第三信号传导基团，所述第三信号传导基团直接或间接产生第三信号以指示所述肽配体上的所述第二未偶联的反应性基团。

14.根据权利要求13所述的方法，其进一步包括在步骤(c)中使用第三探针之后将在所述遗传展示系统上展示的所述肽配体暴露至第四探针，其中所述第四探针与所述遗传展示系统结合并且包含或可连接至第四信号传导基团。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述第四信号传导基团由所述第三信号触发以产生第四信号。

16.根据权利要求14所述的方法，其中所述第四信号传导基团产生第四信号，所述第四信号触发所述第三信号传导基团以产生第三信号。