[发明专利]抗苗勒管抑制物质抗体及其用途

说明书

在卵巢癌中，苗勒管抑制物质(MIS)II型受体(MISRII)和MIS/MISRII信号传导通路是潜在的治疗靶标。相应地，三种MIS I型受体(MISR1；ALK2、ALK3和ALK6)在该癌症中的作用需要阐明。使用四种卵巢癌细胞系和分离自患者肿瘤腹水的卵巢癌细胞，发明人发现ALK2和ALK3是分别在低和高MIS浓度下参与MIS信号传导的两个主要的MISRI。此外，高MIS浓度与细胞凋亡和克隆源性存活下降有关，而低MIS浓度则提高癌细胞活力。最后，发明人表明抗MIS抗体B10抑制MIS的促存活作用。这些最终结果为抑制MIS增殖效应的创新治疗方法的开辟新的途径，而非施用高剂量的MIS以诱导癌细胞凋亡。

技术领域

本发明涉及抗苗勒管抑制物质(MIS)抗体及其在有需要的受试者中治疗MIS或MISRII阳性癌症，并且更特别地，治疗妇科癌症、肺癌或结直肠癌中的用途。

背景技术

苗勒管抑制物质(MIS)是TGFβ家族成员，通过结合其募集I型受体(MISRI：ALK2、ALK3和ALK6)的特异性受体(MIS II型受体；MISRII)而发挥作用。MISRI磷酸化诱导SMAD 1/5/8磷酸化及其迁移到细胞核中，其中通过SMAD4，它们调节不同的相应基因，这取决于靶组织(di Clemente等，2010；Josso和Clemente，2003)。临床前体外和体内研究结果以及来自临床样品的数据(Bakkum-Gamez等，2008；Masiakos等，1999；Meirelles等，2012；Pépin等，2015；Renaud等，2005；Wei等，2010)已经证明，MISRII和MIS/MISRII信号传导通路是妇科肿瘤，特别是卵巢癌的潜在治疗靶标(Kim等，2014)。该信号级联可使用重组MIS或抗MISRII抗体被靶向。然而，重组MIS的使用受到与生产足够数量的生物活性MIS及其在肿瘤部位的递送相关的阻碍(Donahoe等，2003)。最近，Pépin等人描述了使用基因治疗的原始生产策略和替代输送方法(尚未进入临床阶段)(Pépin等人，2013，2015)。在抗MISRII抗体(Salhi等，2004)和抗体片段(Yuan等，2006，2008)中，单克隆抗体(MAb)12G4及其人源化版本已经在临床前研究中得到广泛的评估(Bougherara等,2017；Estupina等，2017；Gill等人，2017；Kersual等，2014)，并且人源化抗体(GM-102或莫伦妥单抗)目前正在临床试验进行测试(NCT02978755、NCT03799731)。糖工程化的莫伦妥单抗的作用机制涉及抗体依赖性细胞介导的细胞毒性和抗体依赖性细胞的吞噬作用，但几乎没有细胞凋亡，这表明该效应与MIS信号传导通路不直接相关(Bougherara等，2017；Estupina等，2017)。事实上，在MISRII阳性的癌细胞中，MIS抑制增殖并诱导细胞凋亡。

为了理解为什么MIS信号传导通路与该抗MISRII MAb的作用机制不相关，发明人分析了三种MISRI(ALK2、ALK3和ALK6)在卵巢癌细胞系和从分离自卵巢癌患者腹水样品的癌细胞中的作用。事实上，尽管ALK2、ALK3和ALK6在几种细胞类型中的作用已经在发育过程中和其他生理条件下被研究(Belville等，2005；Clarke等，2001；Josso等，1998；Orvis等，2008；Sèdes等，2013；Visser等，2001；Zhan等，2006)，但很少有数据可用于癌症。Basal等人证明MISRII、ALK2、ALK3和ALK6在上皮性卵巢癌中表达(262个样品的免疫组化分析)，但未评估其具体作用(Basal等，2016)。

在本文中，发明人发现ALK2和ALK3是四个卵巢癌细胞系(源自两种上皮性卵巢肿瘤和两种性索间质肿瘤，包括一个颗粒细胞肿瘤)中用于MIS信号传导的两个主要MISRI，并且它们根据MIS浓度具有不同的作用。他们随后表明，使用MIS siRNA和新的抗MIS抗体B10可以抑制低浓度(低于0.5至13nM)下MIS对癌细胞活力的促进。这一观察开辟了抑制MIS增殖作用的创新治疗方法的途径，而不是施用高剂量的MIS以诱导细胞凋亡。

发明概述