[发明专利]异二聚体蛋白

说明书

本文提供了异二聚体蛋白(例如，多特异性抗体)，其相对于天然存在的抗体表现出增强的与人Fcγ受体IIIA(FcγRIIIA)的结合，并且保留良好的可制造性。此类异二聚体蛋白尤其可用作多特异性结合蛋白(例如，多特异性抗体)。还提供了药物组合物，其包含这些异二聚体蛋白、编码这些异二聚体蛋白的核酸和用于制备这些异二聚体蛋白的表达载体和宿主细胞。

相关申请的交叉引用

本申请要求2019年9月27日提交的美国临时申请第62/906,918号的权益，所述临时申请通过引用整体并入本文中。

技术领域

本公开涉及异二聚体蛋白(例如，多特异性抗体)及其制备方法。

背景技术

包含两种或更多种结合特异性的多特异性结合分子(例如，多特异性抗体)作为治疗剂具有很大的前景，因为这些分子能够在体内调节多个靶标的活性。用于产生多特异性抗体的一个常见方法是异二聚化两种不同抗体的重链。为了促进这种异二聚化，两种抗体的CH3结构域被工程化以含有互补的突变集合，所述突变集合相对于同二聚化产生对重链异二聚化的偏好(参见例如，Ridgway J.B.等人,1996,Protein Eng.,9:617-621；和美国专利第9,409,989号，其各自通过引用整体并入本文)。

在某些情况下，相对于对应天然存在的抗体的Fc区的结合，需要增强多特异性抗体的Fc区与人Fcγ受体IIIA(FcγRIIIA)的结合。根据EU索引，实现这种增强的FcγRIIIA结合的一种方法是工程化多特异性抗体的Fc区以包含在Fc区的氨基酸位置239、330和332处的特定氨基酸突变(参见例如，Lazar,G.A.等人,2006,PNAS,103(11):4005-4010)。然而，申请人已发现，根据EU索引，在氨基酸位置366、368和407处将这些Fc突变与异二聚化增强的Fc突变组合可负面影响包含这些突变的多特异性抗体的可制造性。

因此，本领域需要改进的多特异性抗体，其表现出增强的与FcγRIIIA的结合，同时保留良好的可制造性。

发明内容

本公开提供了异二聚体蛋白(例如，多特异性抗体)，其相对于对应天然存在的抗体表现出增强的与FcγRIIIA的结合，并且表现出良好的可制造性。异二聚体蛋白一般包含第一Fc多肽，其包含分别在氨基酸位置239、332和366处的天冬氨酸、谷氨酸和色氨酸；和第二Fc多肽，其分别包含在氨基酸位置239、366、368和407处的天冬氨酸、丝氨酸、丙氨酸和缬氨酸，但不包含在氨基酸位置332处的谷氨酸，其中氨基酸位置根据EU索引进行编号。在某些实施方案中，所述异二聚体蛋白包含第一Fc多肽，其包含分别在氨基酸位置239、330、332和366处的天冬氨酸、亮氨酸、谷氨酸和色氨酸；和第二Fc多肽，其包含分别在氨基酸位置239、366、368和407处的天冬氨酸、丝氨酸、丙氨酸和缬氨酸，但不包含分别在氨基酸位置330和332处的亮氨酸和谷氨酸，其中氨基酸位置根据EU索引进行编号。此类异二聚体蛋白作为多特异性结合蛋白(例如，多特异性抗体)特别有用。还提供了药物组合物，其包含这些异二聚体蛋白、编码这些异二聚体蛋白的核酸和用于制备这些异二聚体蛋白的表达载体和宿主细胞。不希望受理论束缚，申请人认为，相对于包含在根据EU索引编号的氨基酸位置239、330、332、366、368和407处的突变的相应Fc多肽，本文公开的异二聚体蛋白的第二Fc多肽具有改善的热稳定性。

因此，在一个方面，本公开提供了异二聚体蛋白。