[发明专利]使用核酸酶靶向的IDLV的精确整合

权利要求书

1.整合缺陷型慢病毒载体(IDLV)，其包含核酸，所述核酸在5'LTR序列和3'LTR序列之间包含：

a.至少一个核输出信号序列，特别是至少一个HIV-1Rev应答元件(RRE)，特别是一个RRE；

b.至少一个选自下组的目标核酸序列：polyA信号；剪接信号序列；DNA或RNA结合位点；启动子；和编码治疗性蛋白或者是治疗性核糖核酸的转基因或其片段；

c.至少一个核酸酶位点，特别是至少一个引导核酸靶向序列(gRNA-T)；

d.任选地，至少一个同源臂序列，其包括与细胞基因组中的目标内源基因组位点的一部分同源的序列；和

e.任选地，至少一个允许增强至少一个目标核酸序列的稳定表达的序列，特别是至少一个土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)序列。

2.根据权利要求1所述的IDLV，其中所述IDLV包括：

d.至少一个同源臂序列，其包括与细胞基因组中的目标内源基因组位点的一部分同源的序列。

3.根据权利要求1或2所述的IDLV，其中所述IDLV是圆形或线形的，特别是圆形的。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的IDLV，其包含至少两个相同或不同的核酸酶位点，特别是至少两个相同或不同的gRNA-T序列，特别是两个相同或不同的gRNA-T序列。

5.根据权利要求4所述的IDLV，其中至少一个目标核酸序列包含在所述IDLV的至少两个，特别是两个核酸酶位点之间。

6.根据前述权利要求中任一项所述的IDLV，其中所述至少一个核酸酶位点与d点的包含在细胞基因组中的目标内源基因组位点中的内源性核酸酶位点相同或不同。

7.根据前述权利要求中任一项所述的IDLV，其中所述IDLV包含至少两个同源臂序列，特别是两个，每个都彼此不同，并且包括与细胞基因组中的目标内源基因组位点的至少两个，特别是两个不同部分同源的序列。

8.根据前述权利要求中任一项所述的IDLV，其中所述IDLV不包含启动子。

9.根据前述权利要求中任一项所述的IDLV，其中所述细胞基因组中的目标内源基因组位点位于球蛋白基因中，特别是选自下组：ε珠蛋白基因、γG珠蛋白基因、γA珠蛋白基因、δ珠蛋白基因、β珠蛋白基因、δ珠蛋白基因、假δ珠蛋白基因、μ珠蛋白基因、假α1珠蛋白基因、α1珠蛋白基因和α2珠蛋白基因，特别是选自下组：γG珠蛋白基因、γA珠蛋白基因、δ珠蛋白基因、β珠蛋白基因、α1珠蛋白基因和α2珠蛋白基因，更特别选自下组：α1珠蛋白基因和α2珠蛋白基因。

10.根据前述权利要求中任一项所述的IDLV，其中所述至少一个目标核酸序列是编码治疗性蛋白或治疗性核糖核酸的转基因或其片段。