[发明专利]分离、检测和分析胎儿细胞的组合物和方法

说明书

提供了用于分离、检测和分析胎儿细胞的组合物、试剂盒和方法。本文还提供了用于制备胎儿细胞样品和用于进行胎儿遗传测试的方法。所述组合物、试剂盒和方法能够包含或使用抗TREML2抗体。可替代地或另外地，所述组合物、试剂盒和方法包含或使用与胶体磁性颗粒和/或外源性聚集增强因子缀合的抗体。

相关申请的交叉引用

本申请要求2019年7月15日提交的美国临时申请号62/874,306的优先权，将其公开内容通过引用以其整体而并入。

背景技术

在过去的四十年里，研究者一直试图分离孕妇中的胎儿细胞以开发产前诊断工具。在20世纪70年代初期，首次开发了羊膜穿刺术，随后在20世纪80年代开发了绒毛膜绒毛取样(CVS)。羊膜穿刺术和绒毛膜绒毛取样(CVS)是常规临床实践中用于诊断染色体异常如常见胎儿非整倍性(染色体的额外拷贝)(例如13、18和21号染色体的三体性(导致唐氏综合征))的两种侵入性方法。

在妊娠期间从母体血液中分离胎儿细胞和胎儿DNA的能力已经为改进非侵入性产前测试开辟了令人激动的机会。最近，在产前筛查中引入了称为非侵入性产前检测(NIPT)的基于无细胞DNA的筛查(cfDNA)，并且已经被公认为对21三体具有高度预测性。然而，筛查性能低于侵入性诊断工具，并且仍然需要确认性测试。此外，根据专业协会(Practicebulletin n163 Obstet Gynecol.2016；127(5)979-981)，NIPT不能预测拷贝数变异(CNV)或微缺失/重复。因此，目前的无细胞NIPT还不足以以高特异性、灵敏度和阳性预测值检测亚染色体缺失和重复。

鉴于母体血液中胎儿细胞的稀缺，对来自母体循环的胎儿细胞的直接分析迄今一直具有挑战性。已经测试了许多不同的富集方法，包括过滤器、密度梯度、荧光激活细胞分选(FACS)、微流体和免疫磁珠。尽管可以回收循环胎儿细胞，但这些方法缺乏一致性和再现性。这是由于极低数量的循环胎儿细胞(1ml含有约1-5百万个细胞的母体血液中有0.1-10个细胞)迄今为止一直阻碍了可再现方案的建立。挑战是在不损失妊娠早期非常少的循环胎儿细胞的情况下消除所有污染性有核血细胞。

考虑到这些限制，以及羊膜穿刺术和绒毛膜绒毛取样(CVS)是具有相关流产风险的程序的事实，需要开发新的基于细胞的NIPD(非侵入性产前诊断)程序以从孕妇的母体血液中选择胎儿细胞，从而筛查出生缺陷和遗传病。

已知胎儿有核红细胞(nRBC)和滋养层细胞存在于母体循环中，但是一直难以开发可靠的基于细胞遗传细胞的NIPT形式。最近，已经提出了开发能够以与目前通过羊膜穿刺术和CVS可以获得的类似的准确度检测异常的基于细胞的NIPT形式的可能性(AmyM.Breman等人,Prenatal Diagnosis,2016,36(11):1009-1019)。

本文公开了胎儿细胞标记物和结合它们的试剂。本文进一步公开了用于基于胎儿细胞标记物分离、检测和分析胎儿细胞的组合物、试剂盒和方法。

发明内容

本文公开了一种用于检测来自怀孕受试者的样品中的胎儿细胞的方法，所述方法包括：(a)使所述样品与第一抗体接触，其中所述样品包含多个细胞；(b)分离结合至所述第一抗体的细胞以产生富集样品；(c)使所述富集样品与第二抗体接触；以及(d)将结合至所述第二抗体的细胞鉴定为胎儿细胞，其中所述第一抗体或所述第二抗体：(i)是与髓系细胞触发受体样转录因子2(Triggering Receptor Expressed on Myeloid Cells Like 2，TREML2)蛋白结合的抗体；或(ii)包含与TREML2蛋白结合的抗原结合片段。

在一些实施方案中，所述胎儿细胞是胎儿有核红细胞(fnRBC)。在一些实施方案中，所述胎儿细胞是滋养层细胞。