[发明专利]方法和分子

说明书

本发明提供了第一多肽和第二多肽的缀合物，其中该第一多肽与该第二多肽之间的连接部包含以下部分。

本披露涉及一种缀合两种多肽的方法和通过所述方法制备的分子。

背景技术

在WO 2018/218093中描述了使用二烯与亲二烯体之间的狄尔斯-阿尔德(Diels-Alder)反应将生物分子缀合到有效负载上。该方法被认为能够在温和的条件下进行，有时在不存在额外试剂的情况下进行。

令人惊讶地发现，通过使用WO 2018/218093中所披露的可以充当二烯和亲二烯体两者的某些部分，可以发生接近度驱动的反应，这些反应可以用于将两种多肽连接在一起。

还描述了在蛋白质中实现非天然的接近度依赖性反应性的几种策略，它们利用规范和非常规氨基酸的互补对将蛋白质单元共价连接在一起。这些对包括携带以下基团的非常规氨基酸：硫醇反应性溴、氟或氟苯官能团(Cigler 2017，Xiang2013，Embaby 2018)；赖氨酸反应性氨基甲酸芳酯基团(Xuan 2017)；以及赖氨酸、组氨酸和酪氨酸反应性氟代硫酸酯基团(Wang 2018)。在这些系统中采用的一般偶联策略是将单个非常规氨基酸与适当的常规氨基酸反应配偶体一起引入蛋白质序列中，使它们在折叠或组装的蛋白质结构中紧邻。

发明内容

本发明的第一方面提供了第一多肽和第二多肽的缀合物，其中第一多肽与第二多肽之间的连接部包含以下部分：

本发明的第二方面提供了一种缀合第一多肽和第二多肽的方法，其中第一多肽和第二多肽各自包含以下部分：

(环戊二烯基，CP)，其中该缀合涉及环戊二烯基部分之间的狄尔斯-阿尔德反应。

本文所用的狄尔斯-阿尔德反应是指形成环己烯环(其是稠环体系的一部分)的4加2环加成反应。

令人惊讶的是，诸位发明人已经确定，两个环戊二烯基基团在温和条件下接近时会发生这种狄尔斯-阿尔德反应。在其他情况下，生物缀合反应可以一步进行，而不需要除两种多肽和溶剂之外的额外试剂。

此外，反应性交联剂和包含环戊二烯基基团的非天然氨基酸可合成获得，并且可以通过简单且直接的路线以高产率产生，如WO 2018/218093中所述。

将环戊二烯基基团并入多肽中

可经由添加接头或通过将非天然氨基酸并入多肽序列中来将环戊二烯基基团并入第一多肽和第二多肽中，如WO 2018/218093中所述。

在一个实施例中，环戊二烯基基团中的至少一个包含在非天然氨基酸中，例如衍生自赖氨酸、半胱氨酸、硒代半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、甘氨酸和酪氨酸的非天然氨基酸中。

在一个实施例中，环戊二烯基基团中的至少一个在氨基酸的侧链中。

在一个实施例中，非天然氨基具有式(I)：

R^X-X¹-O_0-1C(O)-氨基酸-残基 (I)

其中：

R^x表示并且

X¹表示

i)饱和或不饱和的支链或非支链C_1-8亚烷基链，其中至少一个碳(例如，1、2或3个碳)被选自O、N、S(O)_0-3的杂原子替换，其中所述链任选地被一个或多个独立地选自氧代、卤素、氨基、-C_1-3亚烷基-N₃或-C_2-5炔基的基团取代；或者