[发明专利]抗体纯化方法及其组合物

说明书

本文描述了纯化在哺乳动物细胞培养物中产生的人源化α4β7抗体，诸如维多珠单抗的方法，以及由所述纯化方法得到的组合物。

技术领域

本发明涉及用于纯化抗α4β7抗体或其片段的方法。

相关申请

本申请要求2019年6月10日提交的美国临时申请62/859,580的优先权。前述申请的全部内容以引用的方式并入本文。

序列表

本申请含有序列表，所述序列表已经以ASCII格式以电子方式提交，并且特此以引用的方式整体并入。所述ASCII副本于2020年6月5日创建，命名为T103022_1120WO_SL.txt且大小为10,015字节。

背景技术

蛋白质的大规模经济纯化已成为生物技术行业中越来越重要的问题。一般而言，生物药物为使用已工程化成大量产生目标治疗性蛋白质的原核(例如细菌)细胞系或真核(例如哺乳动物或真菌)细胞系，通过细胞培养而产生。由于所用细胞系为活生物体，所以必须对其饲喂包含糖、氨基酸和生长因子的复合细胞培养基，所述复合细胞培养基有时由动物血清制剂供应。将所需重组治疗性蛋白质与工艺相关杂质，包括例如细胞培养基组分、宿主细胞蛋白质(HCP)、宿主核酸和/或色谱材料，以及产物相关杂质诸如聚集体、错误折叠的物质或目标蛋白质的片段分离以实现足以用作人用治疗剂的纯度为巨大的挑战。

产物相关杂质和工艺相关杂质，包括聚集体在内，可能会干扰纯化工艺，在储存期间影响蛋白质，和/或在将抗体作为药物施用于受试者后，可能会引起不良反应(Shukla等人,J.Chromatogr.B.Analyt.Technol.Biomed.Life Sci.,848(1),28-39)。

因此，本领域中仍然需要将治疗性蛋白质，例如抗体纯化至高纯度，同时有效地移除杂质，提高蛋白质的回收率并维持治疗需求的改进的方法。

发明内容

本发明尤其提供用于例如从液体溶液纯化抗α4β7抗体，诸如维多珠单抗(vedolizumab)的方法。

在一个方面中，本发明的特征在于一种用于从包含抗α4β7抗体和一种或多种杂质的液体溶液获得包含抗α4β7抗体的组合物的方法，所述方法包括使包含蛋白质A的基质与包含所述抗α4β7抗体和一种或多种杂质的所述液体溶液接触，由此使所述抗α4β7抗体结合至所述蛋白质A；用洗涤溶液洗涤包含蛋白质A的所述基质；以及通过使包含蛋白质A的所述基质与pH值为3.2至4的洗脱溶液接触，从所述基质洗脱所述抗α4β7抗体，由此获得包含所述抗α4β7抗体的组合物，其中所述抗α4β7抗体为人源化抗体，为IgG1抗体，包含含有如SEQID NO:4中所示的CDR3结构域、如SEQ ID NO:3中所示的CDR2结构域和如SEQ ID NO:2中所示的CDR1结构域的重链可变区；并且包含含有如SEQ ID NO:8中所示的CDR3结构域、如SEQID NO:7中所示的CDR2结构域和如SEQ ID NO:6中所示的CDR1结构域的轻链可变区。

在一个实施方案中，所述方法用于从包含所述抗α4β7抗体和一种或多种杂质的液体溶液获得包含少于1％的高分子量(HMW)聚集体的组合物，所述方法包括使包含蛋白质A的基质与包含所述抗α4β7抗体和一种或多种杂质的所述液体溶液接触，由此使所述抗α4β7抗体结合至所述蛋白质A；所述用洗涤溶液洗涤包含蛋白质A的所述基质；以及所述通过使包含蛋白质A的所述基质与pH值为3.2至4的洗脱溶液接触，从所述基质洗脱所述抗α4β7抗体，由此获得包含少于1％HMW聚集体的组合物。

在一个实施方案中，所述蛋白质A固定于固相上。在一个实施方案中，所述固相包含珠粒、凝胶和树脂中的一者或多者。

在一个实施方案中，所述洗涤溶液的pH值为约7。在一个实施方案中，所述洗脱溶液包含柠檬酸。

在一个实施方案中，所述洗脱溶液的pH值为3.2至3.7。