[发明专利]抗体纯化方法及其组合物

权利要求书

1.一种用于从包含抗α4β7抗体和一种或多种杂质的液体溶液获得包含所述抗α4β7抗体的组合物的方法，所述方法包括

使包含蛋白质A的基质与包含所述抗α4β7抗体和一种或多种杂质的所述液体溶液接触，由此使所述抗α4β7抗体结合至所述蛋白质A；

用洗涤溶液洗涤包含蛋白质A的所述基质；以及

通过使包含蛋白质A的所述基质与pH值为3.2至4的洗脱溶液接触，从所述基质洗脱所述抗α4β7抗体，由此获得包含所述抗α4β7抗体的组合物，

其中所述抗α4β7抗体为人源化抗体，为IgG1抗体，包含含有如SEQ ID NO:4中所示的CDR3结构域、如SEQ ID NO:3中所示的CDR2结构域和如SEQ ID NO:2中所示的CDR1结构域的重链可变区；并且包含含有如SEQ ID NO:8中所示的CDR3结构域、如SEQ ID NO:7中所示的CDR2结构域和如SEQ ID NO:6中所示的CDR1结构域的轻链可变区。

2.如权利要求1所述的方法，其中包含所述抗α4β7抗体的所述组合物包含少于1％的高分子量(HMW)聚集体。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述蛋白质A固定于固相上。

4.如权利要求3所述的方法，其中所述固相包含珠粒、凝胶和树脂中的一者或多者。

5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述洗涤溶液的pH值为约7。

6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述洗脱溶液包含柠檬酸。

7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述洗脱溶液的pH值为3.2至3.7或3.3至3.8。

8.一种用于从包含抗α4β7抗体和一种或多种杂质的液体溶液获得包含抗α4β7抗体的组合物的方法，所述方法包括

使包含抗α4β7抗体和至少一种杂质的溶液与疏水相互作用色谱(HIC)树脂在允许所述抗α4β7抗体流动通过所述HIC树脂的条件下接触，由此获得包含所述抗α4β7抗体的组合物，

其中所述HIC树脂被表征为高疏水性HIC树脂，

其中所述抗α4β7抗体为人源化抗体，为IgG1抗体，包含含有如SEQ ID NO:4中所示的CDR3结构域、如SEQ ID NO:3中所示的CDR2结构域和如SEQ ID NO:2中所示的CDR1结构域的重链可变区；并且包含含有如SEQ ID NO:8中所示的CDR3结构域、如SEQ ID NO:7中所示的CDR2结构域和如SEQ ID NO:6中所示的CDR1结构域的轻链可变区。

9.如权利要求8所述的方法，其中包含所述抗α4β7抗体的所述组合物包含少于0.6％的HMW聚集体。

10.如权利要求8或9所述的方法，其中所述HIC树脂用pH值小于约7.2的磷酸盐缓冲液平衡。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述磷酸盐缓冲液包含约0.35M至约0.15M磷酸钾。

12.如权利要求8至11中任一项所述的方法，其中所述树脂负载量为约55至75mg/ml。

13.如权利要求8至12中任一项所述的方法，其中所述组合物包含少于约0.22ppm的残留蛋白质A。

14.如权利要求8至13中任一项所述的方法，其中所述组合物含有少于约0.3ppm的宿主细胞蛋白质(HCP)。

15.如权利要求8至14中任一项所述的方法，其中所述高疏水性HIC树脂的平均孔径为约50至150μm。