[发明专利]产生调节性B细胞的方法及其用途

说明书

本申请提供用于扩增调节性B细胞群体的方法，所述方法包括改造B细胞群体以表达CD40配体。本发明还提供使用所述调节性B细胞治疗免疫病症的方法。

本申请要求于2019年4月12日提交的美国临时专利申请系列号62/833,174的优先权，该美国临时专利申请通过引用完全结合在本文中。

背景

1.技术领域

本发明整体上涉及医药和免疫学领域。更具体地，本发明涉及调节性B细胞群体及其用途。

2.相关技术说明

调节性B细胞(regulatory B cell，Breg)能够抑制免疫应答，起抗自身免疫性疾病的重要作用并且提供移植耐受性。由于外周血仅包含少量百分比的这些抑制性免疫细胞，因此利用离体扩增方法来产生数量充足的抑制性细胞用于免疫相关疾病的体内治疗或预防。目前用于扩增Breg的方法包括BCR连接和CD40配体(Taitano等人,2016)。

然而，免疫疗法，如用于炎性病症的免疫疗法，通常需要大量的细胞，并且因此优化体外诱导B细胞增殖的方法以使产生的Breg数目最大化并使产生数量充足的抑制性细胞所需的时间最小化是至关重要的。因此，对于有效扩增以产生用于治疗多种免疫疾病(包括自身免疫性、感染、癌症和cGVHD)的Breg的方法存在尚未满足的需求。

发明内容

因此，本公开内容的某些实施方案提供关于Breg扩增的方法和组合物以及使用这些抑制性Breg细胞治疗和/或预防任意免疫相关的疾病的方法。在一个实施方案中，提供用于产生抑制性调节性B细胞(Breg)的体外方法，所述方法包括获得B细胞群体；改造B细胞以表达CD40配体(CD40L)；以及扩增所述改造的B细胞以产生所述Breg。

在一些方面中，CD40L是可溶性CD40L(sCD40L)。在某些方面中，获得B细胞群体包括从血液样品和/或骨髓分离B细胞。在一些方面中，获得B细胞群体包括从CD34⁺造血干细胞和/或诱导性多能干细胞(iPSC)分化B细胞。在某些方面中，分离包括进行抗体珠粒选择或荧光相关细胞分选(FACS)。在一些方面中，所述血液样品是外周血或脐带血。在具体的方面中，所述血液样品是脐带血(CB)。在某些方面中，所述脐带血是从2个以上单个脐带血单位汇集的。在一些方面中，所述脐带血是从3个、4个或5个单个脐带血单位汇集的。

在某些方面中，所述B细胞群体是CB单核细胞(CBMC)。在一些方面中，所述B细胞群体是CD5⁺CD1d^hi B细胞。在具体的方面中，所述B细胞群体是全部B细胞。在特定方面中，多于90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的B细胞群体包含B细胞。

在一些方面中，所述方法还包括在改造B细胞之前活化B细胞。在某些方面中，活化包括在IL-2、CpG寡脱氧核苷酸(ODN)、CD40L、抗-IgM和/或抗-IgG的存在下培养B细胞。在一些方面中，活化包括在CpG ODN和CD40L的存在下培养B细胞。

在一些方面中，活化包括在IL-2、CpG ODN、抗-IgM和抗-IgG的存在下培养B细胞。在某些方面中，CpG ODN以1-5μg/mL的浓度存在，诸如1、2、3或3μg/mL，特别是3μg/mL。在一些方面中，IL-2以50-200IU/mL的浓度存在，诸如50、100、150或200IU/mL，特别是约100IU/mL。在某些方面中，抗-IgM和抗-IgG以5-20μg/mL的浓度存在，诸如5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或20μg/mL，诸如10μg/mL。在具体的方面中，活化持续40-48小时，诸如约41、42、43、44、45、46、47或48小时。