[发明专利]产生调节性B细胞的方法及其用途

权利要求书

1.产生抑制性调节性B细胞(Breg)的体外方法，所述方法包括：

(a)获得B细胞群体；

(b)改造B细胞以表达CD40配体(CD40L)；和

(c)扩增所述改造的B细胞以产生所述Breg。

2.根据权利要求1所述的方法，其中CD40L是可溶性CD40L(sCD40L)。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中获得B细胞群体包括从血液样品、骨髓或二者分离B细胞。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中获得B细胞群体包括从CD34⁺造血干细胞、诱导性多能干细胞(iPSC)或二者分化B细胞。

5.根据权利要求3所述的方法，其中分离包括进行抗体珠粒选择或荧光相关细胞分选(FACS)。

6.根据权利要求3所述的方法，其中所述血液样品是外周血、脐带血或二者。

7.根据权利要求3所述的方法，其中所述血液样品是脐带血(CB)。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其中所述脐带血是从2个以上单个脐带血单位汇集的。

9.根据权利要求6-8中任一项所述的方法，其中所述脐带血是从3个、4个或5个单个脐带血单位汇集的。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述B细胞群体是CB单核细胞(CBMC)。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述B细胞群体是CD5⁺CD1d^hi B细胞。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述B细胞群体是全部B细胞。

13.根据权利要求12所述的方法，其中多于90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的B细胞群体包含B细胞。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其还包括在改造B细胞之前活化B细胞。

15.根据权利要求14所述的方法，其中活化包括在IL-2、CpG寡脱氧核苷酸(ODN)、CD40L、抗-IgM和/或抗-IgG的存在下培养B细胞。

16.根据权利要求14或15所述的方法，其中活化包括在CpG ODN和CD40L的存在下培养B细胞。

17.根据权利要求14或15所述的方法，其中活化包括在IL-2、CpG ODN、抗-IgM和抗-IgG的存在下培养B细胞。

18.根据权利要求15-17中任一项所述的方法，其中所述CpG ODN以3μg/mL的浓度存在。

19.根据权利要求15-18中任一项所述的方法，其中所述IL-2以100IU/mL的浓度存在。

20.根据权利要求15-19中任一项所述的方法，其中所述抗-IgM和抗-IgG以10μg/mL的浓度存在。